芽孢染色原理课件.ppt

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1、实验一显微镜（油镜）的使用和细菌的三种基本形态观察一、实验目的1、学习并掌握油镜的基本原理和使用方法。2、观察和识别细菌的三种基本形态。二、基本原理1、增加照明强度在油镜与载玻片之间加入与玻片的折射率相仿的镜油，使进入物镜的光线不会由折射或反射造成损失，基本上全进入镜头，结果提高了照明强度，使图像更加清晰。折射率(n)空气1.00水1.33香柏油1.52玻璃1.552、增加显微镜的分辨率分辨率是指显微镜能分辨两点间最小距离的能力。D值愈小则表明分辨力愈强。D=0.61λ/NANA=n·sinα/2λ：光波波长NA：物镜的数值孔径值n：介质折射率α：镜口角（总

2、是小于180°）三、实验器材1、标本：细菌三型玻片。2、试剂：香柏油、镜头清洗液（V乙醚:V酒精＝7:3）。3、器具：显微镜（有油镜）、擦镜纸、玻璃棒等。四、实验步骤1、放置标本:将染色的细菌三型玻片置于镜台上。2、找合适的视野:先用低倍镜寻找合适的视野并将欲观察的部位其移到视野中央。3、转换油镜：将油镜转到工作位置。4、调节聚光器与油镜数值孔径一致：将聚光器上升到最高位置，可变光阑开到最大。5、加香柏油：使油镜镜头浸入香柏油中。注意油镜镜头千万不要压在玻片标本上。6、调焦：转动粗调焦螺旋，再缓慢地提升油镜调焦至物像清晰。注意下降或上升镜筒或载物台绝不可用力过

3、猛。7、观察:仔细观察细菌的三种基本形态8、显微镜用毕后的处理:上升镜筒，取下玻片，清洁油镜棒状杆菌螺旋菌注意事项1、油镜工作距离短，故操作时要特别谨慎，切忌用眼睛对着目镜边观察边下降镜筒，而应从侧面注视。2、调焦时，应特别注意，切勿将粗调节器向反方向(由高向低)转动而损失镜头和玻片。实验报告1、绘细菌三种基本形态图2、简述油镜的工作原理实验二细菌的芽孢染色和革兰氏染色法一、实验目的1、学习并掌握革兰氏染色和芽孢染色的原理和方法。2、了解革兰氏染色和芽孢染色在细菌分类鉴定中的重要性。1、革兰氏染色原理革兰氏染色法是Gram发明的一种细菌鉴别染色法，通过这种染

4、色方法，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌；一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。其染色原理主要根据两类细菌的细胞壁化学组成和结构不同。二、基本原理二、基本原理通过结晶紫液初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫液和碘液的复合物，G+细菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，因此遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。反之，G-细菌的细胞壁薄，外膜层类脂含量高，肽聚糖层薄，交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解，

5、这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此细胞褪成无色。再经番红、沙黄等红色染料复染,就使G-细菌呈现红色,而G+细菌则保留紫色。1、革兰氏染色原理染色结果：阳性细菌（G+）：染成紫色染色结果：阴性细菌（G-）：染成红色2、芽孢染色原理细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦着色后又难以脱色这一特点，用着色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸，在加热条件下，延长染色时间，使染料不仅进入菌体也进入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色就难以被水洗脱，当用对比

6、度大的复染剂番红复染后，芽孢仍保留初染剂的绿色，而菌体则被染成复染剂的红色。三、实验器材1、菌种：大肠埃希氏菌（Escherichiacoli）枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）或巨大芽孢杆菌（Bacillusmegaterium）。2、试剂：革兰氏染液:草酸铵结晶紫染液、卢戈氏典液、95%乙醇、番红复染液；芽孢染液:5%孔雀绿染色液、0.5%番红水溶液。3、器具：显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、镊子、木夹、香柏油、酒精乙醚液、擦镜纸等。1、革兰氏染色四、实验步骤涂片：用接种环挑取少许菌苔

7、于水滴中混匀后，再挑取2-3环菌悬液至另一载片上涂开。干燥：室温自然干燥或电吹风吹干固定：涂片朝上，通过火焰2-3次，染色镜检清洁显微镜初染：滴加草酸铵结晶紫覆盖涂片区域染色2min，水洗。媒染：滴加卢氏碘液，染色1min，水洗。脱色：用滴管加95%乙醇冲洗脱色约30秒，立即水洗。复染：滴加番红液复染约2min，水洗。制片染色滴加孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽时开始计时5min。加热过程中要及时添加染色液，切勿让标本干涸。水洗待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出的水无色为止。复染用番红染色液复染2min水洗待玻片冷却后，用缓流自来

8、水冲洗至流出的水无色为止。镜检干燥后用