血清白蛋白测定ppt课件.ppt

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1、血清总蛋白测定(双缩脲法)血清白蛋白测定（溴甲酚绿法）实验一、血清总蛋白测定实验目的⒈掌握双缩脲法测定总蛋白的原理及注意事项。⒉熟练测定操作步骤。⒊了解TP测定的主要临床意义。实验原理蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作用生成紫红色的络合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质的含量成正比，与同样处理的蛋白标准液比较，经计算或查标准曲线即可求出血清蛋白质含量。蛋白质分子中的肽键在碱性条件下能与铜离子作用生成紫红色的络合物与两分子尿素缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫色物质的反应相似，故称之为双缩脲反应

2、。双缩脲结构:H2N—OC—NH—CO—NH2试剂:试剂双缩脲试剂：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O)3.0g,溶于500mL新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中，加酒石酸钾纳(NaKC4H4O6·4H2O)9.0g，碘化钾5.0g，待完全溶解后，加入6mol/LNa2OH100ml,最后加蒸馏水至1000mL。240mmol/LNaOH溶液蛋白质标准液：市售。实验操作混匀,置37℃水浴6分钟，以”B”管校”0”,λ=546nm比色,读取A值计算。实验结果及报告计算及结果报告：血清总蛋白(TP)=A测/A标×C标（C

3、标=70g/L）结果报告：被检者：TP__________g/L［60～80g/L］＿＿＿年＿＿月＿＿日检查者：＿＿＿＿注意事项：1、由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表示。2、双缩脲反应并非蛋白质的颜色反应。凡分子内含有两个或两个以上氨基甲酰基（－ＣＯＮＨ2），不论是直接相连还是通过一个氮或碳原子间接连接，均可呈双缩脲反应。如缩二脲，草酰二胺２，丙二酰胺等3、双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原．4、高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对

4、照来校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行比色．5、血清ＴＰ＞100g/L时，需作稀释处理，结果乘上稀释倍数．临床意义：清总蛋白生理性波动：长久卧床者比直立活动者约低3～5g/L；新生儿比成人低5～8g/L；60岁以上的老人约比青壮年低2g/L。清总蛋白增高：血液浓缩：腹泻、呕吐等。合成增加：如多发性骨髓瘤等。清总蛋白降低：①血液稀释：过多注射低渗溶液，各种原因引起的水钠潴留。②摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严重结核病等。③合成障碍：肝脏疾病。④蛋白质丢失：严重烧

5、伤时大量血浆渗出，肾综合症等。实验二、血清白蛋白测定【实验要求】掌握BCG法测定血清Alb的实验原理与方法；学习微量加样器的使用方法；能熟练使用分光光度计。熟悉实验方法学评价了解血清白蛋白测定的临床意义【实验原理】在pH4.2的缓冲液中，清蛋白作为一种阳离子与阴离子染料溴甲酚绿（bromocresolgreen，BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，颜色深浅与清蛋白含量成正比，与同样处理的清蛋白标准液比较，可求得血清清蛋白含量。【操作】取试管三支，标明测定、标准和空白管，按表操作。加入物/ml测定管标

6、准管空白管工作试剂4.04.04.0标准液0.02样品0.02生理盐水0.02充分混匀，置室温10min，用630nm波长比色，以空白管调零，读取各管吸光度。【计算】血清清蛋白（g/L）＝A测/A标×清蛋白标准液浓度g/L清蛋白标准液浓度g/L=40g/L同时测定血清清蛋白与总蛋白，以总蛋白浓度减去清蛋白浓度，即得球蛋白（G）浓度，并计算清蛋白与球蛋白比值（A/G比值）。【参考范围】清蛋白：35～55g/L球蛋白：20～29g/LA/G：1.5～2.5/1【临床意义】1.血清清蛋白（1）增高　常见于严重脱水所致的血浆浓缩

7、。（2）降低　临床上较常见，与总蛋白降低的原因大致相同。急性降低常见于大量出血或严重烧伤；慢性降低见于肾病蛋白尿、肝功受损、肠道肿瘤与结核、慢性出血、营养不良和消耗性疾病等。清蛋白如低于20g/L，患者可出现水肿。2.血清球蛋白（1）增高　严重脱水、炎症、免疫系统疾病和肿瘤。（2）降低　血液稀释、严重营养不良、胃肠道疾病等。肾上腺皮质激素和其它免疫抑制剂有抑制免疫功能的作用，会导致球蛋白合成减少。球蛋白浓度如低于10g/L时，可怀疑为无γ球蛋白血症。3.清蛋白与球蛋白比值（A/G）　临床上常用A/G值衡量肝病的严重程度，

8、当A/G值小于l时，称比值倒置，为慢性肝炎或肝硬化的特征之一。【方法评价】1.高胆红素血症和溶血标本对本法不产生干扰。严重高脂血症可使结果偏高，应采用标本空白校正。若标本混浊，可做标本空白（血清0.02ml，加琥珀酸缓冲液4ml），用测定管吸光度减去标本空白管吸光度后再计算结果。2.BCG系一种pH指示剂，它受酸、碱