种子dna 提取方法

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1、种子DNA提取方法种子DNA的制备　　和叶片相比，大多数种子更适用于碱裂解法，然而对于富含多糖和多酚的种子，仍需要使用CTAB来抽提。这些方法对小麦和大豆种子非常有效。　　种子的碱性裂解1.在摇床上用2％漂白液清洗种子10分钟后，再用水清洗3次，每次5分钟。2.用灭菌的刀片将种子剖成两半，并放入2毫升管中。3.根据种子大小（大豆种子400μl，小麦种子100μl）加入适量的裂解溶液（100mMTris-HCl,pH9.5,1MKCl,10mMEDTA）。4.95°C孵浴10分钟。5.吸取上清，并取适量用于扩增反应。种子的CTAB抽提法1.在摇床上用2％漂白液清洗种子10分钟后，再

2、用水清洗3次，每次5分钟。2.在液氮中用无菌研杵研磨种子。用500-800μl的CTAB抽提缓冲液（2%CTAB,100mMTris-HCl,1.4MNaCl,20mMEDTA）转移至40ml锥底管中。轻轻混匀后55°C孵浴20分钟。3.1500g离心5分钟。4.转移上清至一个干净管中，加入等体积的氯仿：异戊醇（24:1），轻轻混合2分钟。5.15000g离心20秒。6.将上层液相转移至已预先加入1/10体积7.5M的乙酸铵和2倍体积的冰冷乙醇的管中。7.轻轻混匀后-20°C放置1小时。8.15000g离心1分钟，弃上清。9.用70％的乙醇清洗沉淀两次，每次清洗混匀后15000g

3、离心30秒。10.晾干沉淀后重悬于50μl的1xTE缓冲液中11.吸取适量用于扩增反应。试剂盒FastDNA™-96Plant/SeedDNAKit天根DP320新型植物基因组DNA提取试剂盒（可用于提取植物组织的DNA）