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1、..-磁珠别离技术摘要:磁珠别离技术是一种分子生物学别离技术,它利用其外表修饰的磁性颗粒对生物分子或细胞的亲和结合而进展别离,能对待别离或待检测的靶标进展高效富集,是一种方便、快速、回收率高、选择性强的方法。磁珠别离技术在生物学方面的应用始于20世纪70年代后期,目前已经在分子生物学、细胞学、免疫学、微生物学、生物化学等领域取得一些令人瞩目的研究成果。根本概念磁珠磁珠是一种通过一定方法将磁性无机粒子与有机高分子结合形成的具有一定磁性及特殊构造的体积在几纳米到几十微米之间的载体微球。载体微球的核心为金属小颗粒,常为铁的氧化物或铁的硫化物,核心外
2、包裹一层高分子材料,最外层是功能基团,载体微球外表可根据需要赋予不同的功能基团(如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,—SH、—CONO2、—CONH2、—SO3H、—SiH3、—环氧基、—CHCl等)，使其表现具有疏水-亲水、非极性-极性、带正电荷-带负电荷等不同物理性质。同时具有磁响应性，在外磁场作用下具有磁导向性。由于载体微球表现的物理性质不同,可结合不同的免疫配基,如抗体、抗原、DNA、RNA等。应用于磁别离技术的磁性载体微球应具备以下特点:粒径比拟小,..word.zl-..-比外表积较大,具有较大的吸附容量;物理和化学性能稳定
3、,具有较高的机械强度,使用寿命长;具有可活化的反响基团,以用于亲和配基的固定化;粒径均一,能形成单分散体系;悬浮性好,便于反响的有效进展。载体微球有纳米级、微粒级的,纳米级的载体微球与微粒级的载体微球相比具有以下优点:尺寸小,扩散速度快,悬浮稳定性好;比外表积大,偶联容量大;超顺磁性,能快速实现磁性粒子的分散与回收。磁珠的制备方法：共沉淀法、悬浮聚合法、乳液聚合法、分散聚合法、包埋法及原子转移自由基聚合法等。免疫磁珠免疫磁珠(Immunomagneticbead,IMB) 简称磁珠,免疫磁珠由载体微球和免疫配基结合而成。免疫磁珠的大小和形状的
4、均一性,可使靶细胞迅速和有效地结合到磁珠上;它的球形构造可消除与不规那么形状粒子有关的非特异性结合;超顺磁性可使磁珠置于磁场时,显示其磁性,从磁场移出时,磁性消除,磁珠分散;保护性壳可防止金属颗粒漏出。将磁珠按磁珠功能基结合的蛋白质不同分为:包被一抗的磁珠、包被二抗的磁珠、未包被的磁珠和包被抗生物素的磁珠。并针对不同抗原制出包被相应抗体的试剂盒,方便了使用。免疫磁珠的主要特点有:别离速度快、效率高、可重复性好;操作简单、不需要昂贵的仪器设备;不影响被别离细胞或其它生物材料的生物学性状和功能免疫磁珠标记方法1直接磁珠和直接标记法：通过物理吸附和
5、共价键结合直接将特意性抗体与磁珠耦合，然后再与相应细胞结合，形成细胞-抗原-抗体-磁珠复合物，在外磁场下直接别离目的细胞。快速、简单、特异性和细胞得率高，灵敏度低，需制备相应的偶联抗体磁珠。2间接磁珠和间接标记法：使用anti-lg..word.zl-..-等与磁珠偶联，通过Anti-lg再使磁珠与二抗体偶联，别离细胞时，先使细胞与一抗特异性结合，然后在与一抗标记磁珠结合，形成细胞-1抗-2抗-anti-lg-磁珠复合体，在外磁场下别离目的细胞的方法。该法增加了细胞的洗涤步骤，特异性也会降低。该法一般用于①没有直标磁珠抗体②需用几种抗体去除多
6、种细胞③目的细胞上特异性抗原分子表达水平低。免疫磁珠分选方法阳性分选：运用特异性抗体偶联磁珠直接从细胞混合物中别离目的细胞的分选方法称为positiveselection.阳性分选中磁珠标记的细胞即为目的细胞。该法简单、快速、细胞得率和纯度较高。如采用anti-CD14磁珠分选CD14+巨噬细胞。阴性分选：用抗体偶联磁珠去除无关细胞，使目的细胞得以纯化和别离的分选方法称为negativeselection.阴性分选中磁珠标记的细胞为非目的细胞。如别离CD4+T细胞时，由于没有专用的CD4+T细胞分选磁珠，可通过anti-CD8、anti-B2
7、20、anti-CD49b、anti-CD11b、anti-Ter119标记磁珠去除CD8+T细胞、B细胞、NK细胞、DC细胞、巨噬细胞、粒细胞等，最终而获得较纯的CD4+T细胞。因此阴性分选法适用于：①从细胞混合物中去除某种类型细胞。如肿瘤细胞。②缺乏针对目的细胞筛选的特异性抗体磁珠时。③抗体和目的细胞结合可能诱导细胞活化，影响后续细胞功能分析时。复合分选：将阴性分选和阳性分选相结合的分选方法。当目的细胞含量特别低，无法直接进展阳性分选时，可采用阴性分选发先出去其他杂细胞，当目的细胞富集到一定程度时在采用阳性分选发筛选目的细胞。根本原理特异
8、性及非特异性的磁珠别离技术..word.zl-..-特异性磁珠别离技术免疫磁珠别离技术是一种特异性磁别离技术。免疫磁珠既可结合活性蛋白质(抗体),又可被磁铁所吸引,
