RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)

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1、------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxRNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)【精品文档】 1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。 2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀

2、浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取，也要这样做，更不能急。后面的步骤和细胞RNA提取一样。 1.贴壁细胞，需要先用胰酶消化后，然后收集到离心管中，离心，去上清，然后用PBS多洗2-3次，以去除多余的胰酶。 悬浮细胞，直接用吸管或者加样枪吹打评壁，以使细胞基本可以被吹下来。然后离心去上清，不需要用PBS洗。 2.然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中，然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升，细胞少的话加0.5毫升就可以)，然后用枪头吹打混匀5-10

3、分钟。（如果有时间就继续往下做，如果没有时间，可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80℃，用的时候提取和新的提取的效果一样。）在冰上操作。 3.上面的混匀5-10【精品文档】【精品文档】分钟，基本可以使细胞裂解，然后可以进行下面的步骤，详细的步骤我就不介绍了。 我只介绍一些需要注意的地方。 1.一定要注意冰上操作，低温离心。 2.戴口罩和勤换手套，去任何东西都要带着手套去取。 3.每次去器材的时候都要用镊子去夹，镊子要在酒精灯上烧一下。 4.所有的器材都要经过DEPC浸泡后高压后才可以使用，所需要的氯仿，酒精，异丙醇等都保证没有被RNA酶污染

4、，不能用没有泡过DEPC的枪头去提取液体，一定要用DEPC浸泡过的枪头去吸，如果发现试剂有可能被污染了，要立即更换。 5.吸取上清一定不要吸到中间层的蛋白，如果吸到蛋白一定要重新用氯仿抽提，因为，吸到的蛋白很可能会对RNA产生降解作用。一定要少吸，不要贪多，RNA提取不要求量，更多的要求质。 6.最后用75%的酒精洗一次就可以，尽量减少RNA提取时间。 7.最后一步，用DEPC水溶解RNA，不要用太多的体积，以保证RNA的浓度。 提取完后，电泳观察结果，如果上面的两条带都比较清楚的话，说明RNA提取的不错，可以一次多逆转录几管，不要把RNA冻存，以后在逆转

5、录的效果不好【精品文档】