DB22-T 2010-2014 家畜(猪牛羊)戊型肝炎病毒的测定 RT-PCR法

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1、ICS11.220B41备案号：41804-2014DB22吉林省本标准仅供内部使用不得翻印地方标准DB22/T2010—2014家畜（猪牛羊）戊型肝炎病毒的测定RT-PCR法本标准仅供内部使用不得翻印DetectionofHepatitisEvirusbyRT-PCRinLivestock（pig/cattle/sheep）2014-02-28发布2014-04-30实施吉林省质量技术监督局发布本标准仅供内部使用不得翻印本标准仅供内部使用不得翻印DB22/T2010—2014本标准仅供内部使用不得

2、翻印前言本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林省畜牧兽医科学研究院。本标准主要起草人：苏双、邵洪泽、许志林、程荣华、王楠、李琳、毛文智、王忠国、李文东，于丹。本标准仅供内部使用不得翻印1DB22/T2010—2014本标准仅供内部使用不得翻印家畜（猪牛羊）戊型肝炎病毒的测定RT-PCR法警告─使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全

3、和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了家畜（猪牛羊）戊型肝炎病毒RT-PCR测定方法。本标准适用于猪、牛、羊等家畜戊型肝炎病毒的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定本标准仅供内部使用不得翻印义下列术语和定义适用于本文件。3.1戊型肝炎病毒HepatitisEvirus[HEV]戊

4、型肝炎病毒科成员。一种单股正链RNA病毒，呈球形、直径27～34nm，无囊膜，核衣壳呈二十面体立体对称。病毒基因组长约7.2knt，有3个开放阅读框（ORF1、ORF2、ORF3）。ORF2位于3′端，为主要的结构基因编码区，可编码核衣壳蛋白。3.2聚合酶链反应polymerasechainreaction[PCR]聚合酶链反应（PCR）技术是一种在体外快速扩增特定DNA片段的方法。由热变性→复性→延伸三步反应组成一个PCR循环，经过多次循环反应，使目的DNA得以大量扩增。3.3反转录reverse

5、transcription[RT]反转录（RT）是以RNA为模板合成互补DNA（cDNA）的过程。4试剂与材料4.1引物2DB22/T2010—2014引物序列见表1，引物浓度为25mmol/L。表1特异性引物序列本标准仅供内部使用不得翻印引物种类引物名称特异性引物的核苷酸序列扩增片段长度（bp）外引物HEV-15'-TAYCGHAAYCAAGGHTGGCG-3'524（第1次PCR引物）HEV-25'-TGYTGGTTRTCRTARTCCTG-

6、3'内引物HEV-35'-ATWCATGGVTCRCCTGTGAA-3'328（第2次PCR引物）H