某集团人群邻苯二甲酸酯类暴露与非酒精性脂肪肝病的相关性研究

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分典号｜？也代码！ｌｆｌＪＨ，＿？丨圾＾．竽山而ｇ升大立ＳＨＡＮＸＩＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ硕士学位论文＊集团人群邻苯二甲酸爾类暴露与非ＳＨ？性Ｍ肪肝病的相关性研ＫｅｘｏｓｕｒｅａａｄｎｏｎａｌｃｏｈｏｌｉｃＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｈｔｂａｌａｔｅｅｓｔｅｒｐｐｆａｔｙｌｉｖｅｒｄｉ￥ｅ＊ｓ？ｉｎａｇｒｏｕｐｏｆｐｅｏｐｌｅ研宄生ｔ张超拍导教师＿白剑英副ｆｔ拽：ａ专业名称，劳动生与环填卫生学研宂方向＊环塊污染均的肝駐毒性学位类型＿科学学位所在学院，公共卫生学院中田－山西二〇—八年五月 山西医科大学硕士学位论文分类号：R124单位代码：10114密级：学号：051510620某集团人群邻苯二甲酸酯类暴露与非酒精性脂肪肝病的相关性研究Associationbetweenphthalateesterexposureandnonalcoholicfattyliverdiseaseinagroupofpeople研究生：张超指导教师：白剑英副教授专业名称：劳动卫生与环境卫生学研究方向：环境污染物的肝脏毒性学位类型：科学学位所在学院：公共卫生学院中国山西二〇一八年五月 学位论文独创性声明■文中任何本人声明■所圼交的学位论文系在白剑英导柙搰导下独立完成的研宄成果引用他人的成杲■均己做出明确渌注或得到！许可．论文内容未包含法律＃义上己厲于他人＿■与我同工作的任何形式的砑芄成柬■也不包含本人己用于其他学位申请的沦文或成果的周志对本研宂所傲的任何贡畎均己在论文中作了明确的说明并表示谢本文如违反上述声明承担以下贵任和后果ｒＵ交＠学校授予的学位证书１ｈ学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报ｔ『逍行公开３、本文按照学校铁定的方式■苟因不鸟取埤学位给学校造成的名誉损寄ｋ本人负贡因论文成果不实产生的法．１＊纠纷论文作者签名：日期；加戍年６月Ｓ学位论文版权使用授权书本人完全了解山西医科大学有关保？１使用学位论文的规定■同意学校保留或向国家，允许论文被袞阅和描阅有关郁门亚机构送交论文的复印件和电子畈；本人授权山西医科大半可以栴本学位论文的全邮或郎分内容说入有关数据库进行检索．可以采用髟印１缩印或其他复Ｗ手段保存论文和忙编本学位论文＊本人高校后发表或＊用学位论文或与该沦文直接相关的学术论文成成果时，著名单位仍然为山西医科大学，（保密论文在解密后应逢守此规定）ｊ９＾ｂｎ论文作者签名：ｕｒｎ：ｔ〇：指导教师签名［ｆｉｌ制；日期日＿＾２１年」Ｌ月＜本＿明的板权扫山科大学有，来经许可，任柯攀位及任何个人不樽擅ｉｔ用ｉ 山西医科大学硕士学位论文目录中文摘要.................................................................Ⅰ英文摘要.................................................................Ⅱ中英文缩写词对照表.......................................................Ⅴ前言......................................................................1第一部分某集团体检人群NAFLD相关危险因素分析............................41.材料和方法.............................................................41.1研究对象..............................................................41.2研究内容..............................................................42.结果...................................................................52.1同煤集团体检人群一般情况...............................................52.2非酒精性脂肪肝病的相关危险因素分析.....................................73.讨论....................................................................94.结论...................................................................10第二部分某集团人群PAEs类暴露与非酒精性脂肪肝病的相关性分析.............111.材料与方法.............................................................111.1研究对象.............................................................111.2仪器与试剂...........................................................111.3尿液前处理...........................................................121.4高效液相色谱串联质谱技术参数设置.....................................13 山西医科大学硕士学位论文1.5质量控制.............................................................142.结果..................................................................142.17种塑化剂代谢产物标准曲线和检测线性范围..............................142.2代谢产物的检出情况...................................................152.3配对人群塑化剂暴露水平与非酒精性脂肪肝相关性分析.....................153.讨论..................................................................174.结论..................................................................20参考文献.................................................................21综述.....................................................................24致谢.....................................................................30个人简介.................................................................31 山西医科大学硕士学位论文某集团人群邻苯二甲酸酯类暴露与非酒精性脂肪肝病的相关性研究摘要目的:动物实验表明PAEs有可能引起肝脏发生慢性脂肪性病变。本文旨在了解我省人群的PAEs内暴露水平和非酒精性脂肪肝病（NAFLD）患病情况的基础上，探索人群邻苯二甲酸酯类暴露水平与NAFLD的相关性，为之后进行的DEHP肝脏损伤作用机制的系统研究提供理论支持，也为今后的NAFLD预防措施提供依据。方法：第一部分：采用问卷调查的方法对两阶段整群随机抽样的某集团3501名体检职工的人口学特征及行为习惯进行调查，由某集团附属医院专业医务人员对被体检人群血糖相关指标、甘油三酯TG、总胆固醇CHOL、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL进行医学检测，参考NAFLD诊断金标准对NAFLD进行诊断。依据不同的数据类型运用相应统计学方法对体检人群人口学特征及行为生活习惯及血脂相关生化指标等进行单因素分析；构建Logistic回归模型进行多因素分析。第二部分：本研究采用1:1配对病例对照的方法进行研究，对年龄和性别匹配后的95对NAFLD患病人群和对照人群尿液中七种PAEs代谢产物利用高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS)进行定性定量分析,分别是邻苯二甲酸单甲酯（Monomethylphthalate，MMP)、邻苯二甲酸单乙酯(Monoethylphthalate,DEP)、邻苯二甲酸单正丁酯(Mono-n-butylphthalate,MBP)、邻苯二甲酸单苄基酯(Monobenzylphthalate,MBzP)、邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯(Mono(2-ethylhexyl)phthalate,MEHP)、单邻苯二甲酸异壬酯(Mono-isn-butylphthalate,MNP)、邻苯二甲酸单异丁酯(Mono-iso-butylphthalate,MOP)。采用Wilconxon配对符秩检验方法进行统计学分析。对配对人群的一般情况、行为习惯情况以及血脂相关指标进行单因素分析，将上述分析有统计学差异的结果与Wilconxon配对符秩检验有差异的代谢产物纳入到多因素条件Logistic回归模型进行多因素分析。结果：I 山西医科大学硕士学位论文1.某集团职工NAFLD检出率高达31.7%。NAFLD单因素分析表明，体检人群病例组和非病例组不同年龄段、性别、BMI指数、婚姻状况、体力活动强度、既往病史（高血压、糖尿病）、食用油口味倾向、睡眠自我评价以及相关血脂指标的差异均具有统计学意义（P<0.05）。将上述变量校正后纳入Logistic回归模型后显示，年龄分组（OR=1.28，1.58，P<0.05)、BMI指数（OR=1.68，P<0.05)、是否患糖尿病（OR=1.79，P<0.05）、血清中甘油三酯TG（OR=1.37，P<0.05）和低密度脂蛋白LDL（OR=1.74，P<0.05）具有统计学差异。2.本实验采用高效液相色谱串联质谱(HPLC—MS)对尿样PAEs代谢产物进行测定，回归方程相关系数均>0.97，检出限范围是0.1-1.0pg/μL，MEHP检出率较低为83.7%，其余代谢产物检出率均在85%以上，病例组七种代谢产物检出含量中位数依次是MMP2.92pg/μL、MEP2.69pg/μL、MBP23.93pg/μL、MBzP0.84pg/μL、MNP0.67pg/μL、MEHP1.26pg/μL、MOP0.98pg/μL，对照组依次为MMP2.41pg/μL、MEP2.74pg/μL、MBP20.04pg/μL、MBzP0.11pg/μL、MNP0.37pg/μL、MEHP0.23pg/μL、MOP0.38pg/μL。Wilconxon配对符秩检验结果表明，病例组与对照组尿液相比PAEs代谢产物MMP、MEP、MBP含量均无明显差异（P>0.05）,MBzP、MEHP、MOP、MNP含量病例组高于对照组，具有显著差异（P<0.05）。经多因素模型校正后，人群BMI指数(OR=3.16，P<0.05)是NAFLD的危险因素；MEHP含量(OR=3.08，P<0.05)每增加一个单位NAFLD患病风险提高2.08倍；MBzP含量(OR=1.58，P<0.05)每增加一个单位NAFLD患病风险提高0.58倍。结论：1.高年龄分组、高BMI指数、既往病史中糖尿病患病情况、血清中高甘油三酯含量（TG）以及高低密度脂蛋白含量（LDL）是其非酒精性脂肪肝患病主要的危险因素。2.某集团人群PAEs较高检出率表明该人群普遍暴露于PAEs污染物。3.DEHP、BBzP等塑化剂暴露可能是机体患NAFLD的危险因素，使机体发生脂质代谢紊乱。关键词：PAEs；非酒精性脂肪肝病（NAFLD）；Logistic回归；高效液相色谱串联质谱(HPLC—MS)II 山西医科大学硕士学位论文AssociationbetweenphthalateesterexposureandnonalcoholicfattyliverdiseaseinagroupofpeopleAbstractObjective:AnimalexperimentshaveshownthatPhthalicAcidEsters(PAEs)maycausechronicfattylesionsintheliver.Thepurposeofthisstudywastoexplorethecorrelationbetweentheexposurelevelofdiestersofphthalateandnonalcoholicfattyliverdisease(NAFLD)onthebasisofunderstandingtheexposurelevelofPAEsandtheprevalenceofnonalcoholicfattyliverdiseaseintheoccupationalpopulationofourprovince.ItprovidestheoreticalsupportforthelatersystematicstudyonthemechanismofliverinjuryinDi(2-ethylhexyl)Phthalate(DEHP),andalsoprovidesthebasisforthepreventivemeasuresofNAFLDinthefuture.Methods:Part1:Thequestionnairesurveymethodwasusedtoinvestigatethedemographiccharacteristicsandbehavioralhabitsofthe3501physicalexaminationworkersinthesamecoalgroup.TheprofessionalmedicalpersonneloftheaffiliatedhospitalsoftheCoalGroupevaluatedthebloodglucose-relatedindicators,triglyceride(TG),totalcholesterol(CHOL),andDensitylipoprotein(HDL)andlow-densitylipoprotein(OX-LDL)weremedicallytestedanddiagnosedaccordingtothediagnosticcriteriaofalcoholicliverdiseaseandNAFLD.Accordingtodifferentdatatypes,thecorrespondingstatisticalmethodswereusedtoanalyzethedemographiccharacteristics,behavioralhabitsandbloodlipid-relatedbiochemicalindicatorsofthephysicalexaminationpopulation;Logisticregressionmethodwasusedtoperformmultivariateanalysisontherelevantindicatorswithstatisticallysignificantdifferencesintheunivariateanalysis..Part2:Inthisstudy,a1:1matchedcase-controlstudywasperformed.Ninety-fivepairsofage-andsex-matchedpairsofNAFLDpatientsandcontrolswereanalyzedforurinaryPAEsmetabolitesbyhighperformanceliquidchromatographytandemmassspectrometry(HPLC-MS)andWilconxonpaired-ranktestwasused.Statisticalanalysis.TheyareMonomethylphthalate(MMP),Monoethylphthalate(DEP),Mono-n-butylphthalate(MBP),andOrtho-phthalate.III 山西医科大学硕士学位论文Monobenzylphthalate(MBzP),Mono(2-ethylhexyl)phthalate(MEHP),Monodecylmonophthalate(Mono-Isn-butylphthalate(MNP),mono-iso-butylphthalate(MOP).Theunivariateanalysiswasperformedonthegeneralconditions,behavioralhabits,andlipid-relatedparametersofthematchedpopulation.ThestatisticallysignificantdifferencesintheaboveanalysiswerecomparedwiththoseoftheWilcoxonpaired-ranktesttothemultivariateconditionallogisticregressionmodel.analysis.Results:1.ThedetectionrateofNAFLDoftheemployeesoftheCoalGroupwasashighas31.7%.UnivariateNAFLDanalysisshowedthatage,sex,BMIindex,maritalstatus,intensityofphysicalactivity,pastmedicalhistoryhypertensiondiabetes,tastetendencyofedibleoil,sleepself-evaluation,andrelatedlipidlevelsinthephysicalexaminationpopulationinthecaseandnon-casegroupsThedifferencesoftheindicatorswerestatisticallysignificant(P<0.05).AfteradjustingtheabovevariablesintoLogisticregressionmodel,agegroupswere5-45yearsoldand≥45yearsold(OR=1.28,1.58,P<0.05),BMIindex(OR=1.68,P<0.05),anddiabetesmellitus.(OR=1.79,P<0.05),serumtriglyceridecontent(OR=1.37,P<0.05)andlow-densitylipoproteincontent(OR=1.74,P<0.05)werestatisticallydifferent.2.Inthisexperiment,highperformanceliquidchromatographytandemmassspectrometry(HPLC-MS)wasusedtodetermineurinePAEsmetabolites.Theregressionequationcorrelationcoefficientswereallhigherthan0.97.Thedetectionlimitswereintherangeof0.1-1.0pg/μLandmetaboliteMEHPdetectionrates.At83.7%,thedetectionrateoftheremainingmetaboliteswasmorethan85%.ThemediancontentofthesevenmetabolitesdetectedinthecasegroupwasMMP2.92pg/µL,MEP2.69pg/µL,MBP23.93pg/µL,MBzP0.84.Pg/µL,MNP0.67pg/µL,MEHP1.26pg/µL,MOP0.98pg/µL,andcontrolgroupMMP2.41pg/µL,MEP2.74pg/µL,MBP20.04pg/µL,MBzP0.11pg/µL,respectivelyMNP0.37pg/µL,MEHP0.23pg/µL,MOP0.38pg/µL.WilconxonpairedranktestresultsshowedthatthecontentofMMP,MEPandMBPinPAESmetaboliteswasnotsignificantlydifferentbetweenthecasegroupandthecontrolgroup(P>0.05),andthedifferenceinMBzP,MEHP,MOP,andMNPlevelswasstatisticallysignificant.Significance(P<0.05),andthecasegroupcontentwashigherthanthecontrolgroup.AftercorrectedbyLogisiticregressionmodel,theriskofhighBMIpopulation(OR=3.16,P<0.05)was3.16timesthatofthegeneralpopulation;theriskofurinaryhighIV 山西医科大学硕士学位论文MEHPcontent(OR=3.08,P<0.05)wascommontothegeneralpopulation;urinaryhighMBzPcontentpopulation(OR=1.58,P<0.05)NAFLDwas1.58timesthatofthegeneralpopulation.Conclusion：1.ThedetectionrateofNAFLDamongemployeesoftheGroupwasashighas31.7%.Comparedwithnon-NAFLDpopulations,theagegroup,non-alcoholicfattyliverpatients,BMIindex,prevalenceofdiabetesinpreviousmedicalhistory,andserumTGandhighandlowdensityLDLarethemaininfluencingfactors.2.TheeffectiveseparationandhighaccuratequantitativedetectionofmanymetabolitesshowedthattheoccupationalpopulationinourprovincewasgenerallyexposedtoPAEspollutants.3.ThecorrectedresultsfromtheLogisiticregressionmodelsuggestthattheexposureofthebodytoPAEsplasticizersislikelytotriggerabnormallipidmetabolismandinducelipidmetabolismdisorders.Keywords:PAEs;NAFLD;Logisticregression;HPLC-MS.V 山西医科大学硕士学位论文中英文缩写词对照表英文缩写英文全称中文全称PAEsPhthalicAcidEsters邻苯二甲酸酯类DMPDimethylphthalate邻苯二甲酸二甲脂DEPDiethylphthalate邻苯二甲酸二乙脂DBPDi-n-butylphthalate邻苯二甲酸二正丁脂BBzPButylbenzylphthalate邻苯二甲酸丁基苄基脂DEHPDi(2-ethylhexyl)Phthalate邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯DNPDi-n-octylo-phthalate邻苯二甲酸二正壬酯DOPDi-o-octylo-phthalate邻苯二甲酸二辛酯MMPMonomethylphthalate邻苯二甲酸单甲酯MEPMonoethylphthalate邻苯二甲酸单乙酯MBPMono-n-butylphthalate邻苯二甲酸单正丁酯MBzPMonobenzylphthalate邻苯二甲酸单苄基酯MEHPMono(2-ethylhexyl)phthalate邻苯二甲酸单（2-乙基己基）酯MNPMono-isn-butylphthalate单邻苯二甲酸异壬酯MOPMono-iso-butylphthalate邻苯二甲酸单异丁酯SBPSystolicbloodpressure收缩压DBPDiastolicbloodpressure舒张压NAFLDnonalcoholicfattyliverdisease,非酒精性脂肪性肝病TGTriglyceride甘油三酯VI 山西医科大学硕士学位论文中英文缩写词对照续表CHOLtotalcholesterol总胆固醇HDLHighdensitylipoprotein高密度脂蛋白LDLLowdensitylipoprotein低密度脂蛋白MEHOPMono(3,5,5-trimethylhexy)Phthalate单(3，5，5．三甲基)邻苯二甲酸酯LODlimitofdetermination检出限VII 山西医科大学硕士学位论文前言随着我们物质水平的日益提升，许多化合物逐渐走近了我们的视野。这些化学物质提供给我们便利的同时，也给我们的身心健康带来了很大的威胁，塑化剂就是典型的代表。20世纪人类社会的最大进步莫过于使用塑料制品使人类的日常生活得到了翻天覆地的改变。塑料制品可以无限次重复使用，其分子是由小分子单体网络结合在一起形成的大分子。目前，全球有超过20种不同使用类型的塑料制品[1]。塑料制品对社会有利影响集中体现在公共卫生领域。目前包括85％的医用器材中都含有塑料成分[2]。塑化剂的使用增强了高分子聚合材料的柔韧性和可塑性。20世纪末，全球塑化剂市场持续走高，我国此类化合物的消耗量占据世界总体消费量的20%以上。亚洲各国普遍使用的是邻苯二甲酸酯类(PhthalicAcidEsters，PAEs)。工业生产中常用的PAEs有邻苯二甲酸二甲酯（Dimethylphthalate，DMP）、邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（Di(2-ethylhexyl)Phthalate,DEHP）等。PAEs具有特殊的理化性质，其与高分子材料并不是稳定的共价键结合[3]。在各种因素共同作用下，逐渐从高分子材料中转移到环境介质中，污染人类生活环境，经多种途径渗透到空气、水源、食物，成为威胁人类健康的重要因素。相关研究[4]表明，邻苯二甲酸酯类可经摄食途径、呼吸系统、皮肤接触进入机体，并逐渐累积到一定水平，经肝脏相关水解酶的水解成为相应的代谢产物,威胁机体健康。考虑到已经明确的PAEs毒性作用，欧盟国家在20世纪末出台了特定塑料制品中限制PAEs的相关规定[5]。邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯在PAEs化合物中使用频率较高，此前鉴于相关研究并未展开，长期被学术界认为是无毒无害物质。DEHP被用于食品包装、建筑材料、化学药品、电子设备等各种产品[6]。目前市售各种肉类、牛奶、蛋类食品和饮料中均可检测到此类物质。加之我国人民的生活习惯正在发生深刻变化，过去以在家就餐吃饭，使用陶制餐具为主，现转变成经常叫外卖或在外就餐，外卖打包食品或快餐店、食堂等常常使用品质参差不齐的塑料袋、塑料餐具或塑料制品，这就意味着普通人群可通过消化道（尤其是塑料包装和塑料餐具盛放食品）大量接触塑化剂类产品,成为我国人群接触DEHP最主要的途径。有研究表明，自然环境中少量的DEHP可在环境介质中蓄积，经高等动物体摄食后产生生物放大作用[7]。另外，医疗卫生领域用于输血、注射等一次性PVC类医疗器械也存在大量邻苯二甲酸酯类塑化剂溶出，直接或间接地威胁着人类的健康。与代谢紊乱密切相关的慢性非传染性疾病之一的非酒精性脂肪肝，随着其疾病谱的日1 山西医科大学硕士学位论文益扩大将成为困扰更多人的健康大问题。我国经济高速稳健发展和人民生活水平日益提升，人们的饮食习惯、消费模式和行为发生了翻天覆地的变化，出现了很多新的健康问题亟待研究。现代人饮食结构中脂肪含量占据了半壁江山，年轻人晚睡熬夜习惯、缺少运动意识等诸多不健康生活方式，使得肥胖、高血压、糖尿病、非酒精性脂肪肝等慢性非传染疾病发病率日益飙升，并且发病趋势不断向年轻人转移。虽然脂肪肝病长久以来被医学界视为良性病变，但是不可否认的是许多慢性肝脏损伤始于弥漫性肝细胞脂肪样变，并且人们的治疗意识较为薄弱，缺乏相应治疗脂肪肝病的相关知识，得不到相应治疗的NAFLD会大概率地发展成为肝脏炎症细胞弥漫性浸润及坏死，最终导致肝脏恶性病变(肝纤维化、肝硬化，甚至肝癌)。相关研究表明，NAFLD诱发肝硬化和肝癌发病率高达7-12%和1.2-2%[8]。非酒精性脂肪肝病日益进军到威胁人类健康的危险领域，因此，对脂肪肝的防治研究不容松懈，近些年来也逐渐成为医学界关注的重点。排除酒精和其他肝脏损害的条件下，以弥漫性肝细胞肿大合并脂肪变性并伴有机体代谢异常的临床病例综合征称为非酒精性脂肪性肝病[9]。Day等于1999年提出对脂肪性肝病机制的探讨，也就是著名的“二次打击学说”[10]。第一次打击主要是机体胰岛素抵抗导致血液中游离脂肪酸水平升高，超过了肝脏β氧化能力及输出能力，致使肝脏脂质累积并激发二次打击。在第二次打击的探索中，Day认为促使肝细胞发生凋亡的因素主要是细胞在应激条件下发生氧化作用并伴随相关细胞因子和促炎症反应，导致细胞线粒体损伤，最终导致脂肪肝病进一步恶化。有相关动物实验结果提示PAEs具有肝脏损伤效应。衷筱琴等发现过量摄入DEHP可导致雄性Wistar大鼠的肝脏质量明显增加，肝功能异常改变，并伴有细胞水肿样变[11]。同时镜下可发现肿大的肝脏细胞内有脂质蓄积，伴有炎症细胞。Dimastrogiovanni等在对虹鳟鱼DEHP长期诱导染毒试验中发现DEHP能够引起其肝细胞脂肪积累和脂肪酸合酶（FAS）表达升高，并伴有炎症细胞浸润[12]。Chen等发现高脂饲喂DEHP染毒大鼠可以促进其肝脏湿重明显增加并伴有脂肪积累[13]。尽管由于种属差异的存在，我们不能将这些结果直接外推到人群，但这些结果仍可能带给我们提出一些重要的启示，就是DEHP有可能引起肝脏发生慢性脂肪性病变。国内PAEs暴露与人群肝脏脂肪变性相关研究相对较少，因此本文在某集团煤矿工人体检调查的基础上，根据诊断标准，筛选出NAFLD病例95人，并按照年龄和性别进行匹配，选定对照人群95例，进行了人群塑化剂内暴露水平测定和人群问卷调查资料的整理，在此基础上进行了人群7种塑化剂暴露水平与NAFLD患病的相关性研究，为今后进行的2 山西医科大学硕士学位论文DEHP肝脏损伤作用机制的系统研究提供理论支持，也为今后的NAFLD一级预防提供相应依据。3 山西医科大学硕士学位论文第一部分某集团体检人群NAFLD发病及相关危险因素分析1材料和方法1.1研究对象研究对象为两阶段整群随机抽样的某煤炭集团在职员工共3501人，同时采集体检当日清晨尿样和血样。1.2研究内容1.2.1调查问卷自行设计调查问卷，基本内容包括一般情况（包括年龄、性别、文化程度、婚姻状况等）、营养调查、既往病史、体力活动强度，个体学指标如身高、体重、体重指数、收缩压(Systolicbloodpressure，SBP)、舒张压(Diastolicbloodpressure，DBP)等。身高采用机械式测量器。被测者免冠赤足背对测量杆，保持身体直立，视线保持水平，两眼目视前方，头发蓬松者应压平后测量，测量单位为cm，测量结果精确到小数点后一位。体重测量采用电子体重秤。测量时，身着夏装，女士建议脱去首饰等物品以求结果真实可靠，测量单位为kg，结果保留一位小数点。血压测量使用电子血压计。被测者保持均匀呼吸情绪稳定静坐5min，脱去上衣，暴露手臂，保持肘关节与心脏同一水平面，袖带平整裹于被测者肘关节上4-5cm处（松紧程度以刚好放入一指为宜）进行测量，多次测量取平均并记录。1.2.2实验室检查待测人员必须隔夜禁食8h以上，次日上午取肘关节部静脉血，在室温25℃下静置30分钟，用标准规格3000转/min离心机离心处理20min，将血清分离，留取3份4ml血清样本于负20℃冷冻室冻存。使用日本OlympusAU2700全自动生物化学仪上集中测血糖指标空腹血糖、糖化血红蛋白和血脂指标甘油三酯TG、总胆固醇CHOL、高密度脂蛋白HDL、低密度脂蛋白LDL等血脂相关生化指标，并记录。4 山西医科大学硕士学位论文1.2.3相关诊断标准血脂指标参考值范围：TG（0.48-1.6mmol/L)、CHOL（3.1-6mmol/L）、HDL(1-1.9mmol/L)、LDL(0-1mmol/L)；糖尿病的判断参照国际糖尿病联盟推荐的糖尿病诊断标准[14]；肥胖和中心性肥胖诊断依据为2000年WHO西太平洋地区肥胖症特别工作组建议[15]；非酒精性脂肪肝病的超声诊断及其病因判断参照中华医学会肝病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2002年修订的酒精性肝病和NAFLD诊断标准：1.无饮酒史或饮酒折合乙醇量男性每周<140g,女性每周<70g。2.除外病毒性肝炎、药物性肝病、全胃肠外营养、肝豆状核变性等可导致脂肪性肝病的特定疾病。3.除原发性疾病的临床表现外，可有乏力、消化不良、肝区隐痛、肝脾肿大等非特异性症状及体征。4.可有体重超重和（或）内脏性肥胖、空腹血糖增高、血脂代谢紊乱、高血压等代谢综合症相关组分。5.血清转氨酶和γ-谷氨酰转肽酶水平可有轻至中度增高（小于5倍正常值上限），通常以ALT增高为主。6.肝脏影像学表现符合弥漫性脂肪性肝病的影像学诊断标准。7.肝活体组织检查组织学改变符合脂肪性肝病的病理学诊断标准[16]。1.2.4资料分析方法对收集的3501份职工体检结果报告相关数据进行汇总整理，使用EpiData软件双重录入，SPSS19.0进行统计分析处理。对参加体检某集团职工一般情况、行为生活习惯状况、血脂相关指标、非酒精性脂肪肝检出及严重程度分布情况进行描述性分析,符合正态_分布的数据用均数±标准差（x±s）表示，用独立样本t检验进行组间差异比较。不符合正态分布的数据用中位数表示，等级资料采用Mann-WhitneyU检验，分类资料等采用χ2检验组间比较。对体检人群相关指标进行单因素分析；运用Logistic回归进行多因素分析。1.2.5质量控制开展正式问卷调查之前，先开展问卷预调查，分析预调查结果并补充和完善调查问卷内容，论证调查的可行性。参与调查和体检的调查员为本课题组参与人员，均已接受流行病学现场调查培训，规范操作方法，并经过考核。负责流行病调查的工作人员在流调过程中使用简单易懂的语言（尽量避免使用专业术语）对问卷所涉及的相关内容进行解释，所有问卷当天整理回收。体检工作小组由某集团医院具有执业资格相关医务人员组成。对回5 山西医科大学硕士学位论文收的问卷有效性进行专业评价，剔除不完整问卷，经专业技术人员进行编号。数据由本课题组专业统计人员进行双重录入，若发现数据不符，及时和问卷负责人沟通并对照改正。2.结果2.1某集团体检人群一般情况本次参加体检人群总数为3501例，男女比例为4.26:1，男性2840例,女性667例，NAFLD检出患病率为31.7%，性别、年龄分布为如下图1-1和图1-2，BMI情况、文化程度、婚姻状况、既往病史情况、饮食口味、体力活动强度、血脂相关指标等见下表1-1。图1-1体检人群性别分布情况图1-2体检人群年龄分布情况表1-1某集团体检人群单因素分析结果指标体检人群非NAFLD组体检人群NAFLD病例组t/Z/χ2P值N23921109年龄46.383<0.001≤35700（29.1%）241（21.7%）35-45895（37.6%）371(30.4%)≥45797（33.3%）497(47.9%)46.383<0.001性别男1878(78.5%)962(86.7%)女514(21.5%)147(13.3%)33.535<0.001BMI指数23.382±2.81127.853±2.89835.311<0.001文化程度：小学及以下613294中学及专科1466658大学及以上2991491.2250.542婚姻状况：未婚82196 山西医科大学硕士学位论文续表1-1已婚21971051离异1423512.3120.002是否患高血压是526422否185268298.708<0.001是否患糖尿病是56106否228297889.521<0.001睡眠自我评价情况好1342675一般857359坏159626.9160.035食用油口味倾向清淡711296适中1195497油腻41927426.381<0.001体力活动强度重度231109中度689334轻度14726670.7430.689甘油三酯（TG）1.23（0.96,1.74）1.99（1.42,2.81)22.318<0.001总胆固醇(CHOL)4.81（4.27,5.37）5.07（4.49,5.75）8.762<0.001高密度脂蛋白(HDL)1.21（1.02,1.43）1.05（0.88,1.22）-16.314<0.001低密度脂蛋白(LDL)2.97（2.50，3.51）3.34（2.85,3.85）12.839<0.001单因素分析表明，体检人群病例组和非病例组文化程度和体力活动强度的统计学差异不明显（P>0.05），而不同年龄段、性别、BMI指数、婚姻状况、既往病史情况（高血压、糖尿病）、食用油口味倾向、睡眠自我评价以及相关血脂生化指标差异均具有统计学意义（P<0.05）。2.2非酒精性脂肪肝病的相关危险因素分析将上述单因素分析结果中有统计学差异的变量年龄段、性别、BMI指数、婚姻状况、既往病史情况（高血压、糖尿病）、食用油口味倾向、睡眠自我评价以及相关血脂生化指标运用向前LR法筛选后纳入到多因素Logistic回归模型进行多因素分析（相关赋值情况7 山西医科大学硕士学位论文见表1-2），分析结果见下表1-3。表1-2多因素Logistic回归模型相关赋值情况变量赋值因变量非酒精性脂肪肝病阴性=1；阳性=2自变量性别男=1；女=2BMI指数连续变量婚姻状况已婚=1；离异=2；未婚=3是否患高血压否=0；是=1是否患糖尿病否=0；是=1睡眠自我评价情况差=1；一般=2；良好=3食用油口味倾向油少=1；一般=2；油多=3表1-3体检人群多因素Logistic回归分析结果变量β标准误χ2POR95%Cl下限上限截距-15.3410.753417.851<0.001年龄0.2500.06912.9580.0031.2841.1201.471性别0.2150.1462.2860.1381.2490.9421.658BMI指数0.5190.021556.481<0.0011.6751.6121.752婚姻状况-0.0900.1260.4790.4910.9140.7171.188睡眠质量-0.0550.0820.4620.4960.9460.8111.115食用油口味0.0800.0731.2920.2521.0840.9471.253高血压0.1520.1181.9430.1671.1650.9421.441糖尿病0.5810.2266.9590.0081.7881.1652.759高密度脂蛋白-0.4000.2542.3550.1290.6710.4021.123低密度脂蛋白0.5520.1719.6020.0021.7361.2372.462甘油三酯0.3100.05033.627<0.0011.3631.2332.469总胆固醇-0.2860.1722.7180.0910.7520.5461.061多因素Logistic回归分析结果表明，模型具有统计学意义（χ2=1503.22，P<0.001）。经模型矫正后，具有统计学差异的变量包括年龄、BMI指数、是否患糖尿病、血清中甘油三酯含量（TG）、低密度脂蛋白含量（LDL）,并且与年龄、BMI指数、血清中甘油三酯含量（TG）、低密度脂蛋白含量（LDL）正相关。8 山西医科大学硕士学位论文3.讨论随着生活方式和生活环境的变化，人群中疾病谱的特征发生了明显改变，各种慢性病的发生率明显上升，非酒精性脂肪肝病作为一类常见病，已然成为困扰很多人的健康大问题。本研究多因素Logistic回归分析结果表明，模型具有统计学意义（χ2=1503.22，P<0.001）。经模型矫正后，具有统计学差异的变量包括年龄分组、BMI指数、是否患糖尿病、血清中甘油三酯含量（TG）、低密度脂蛋白含量（LDL）。由上表1-3可知，相比于非NAFLD人群，非酒精性脂肪肝患者的年龄分组、BMI指数、既往病史中糖尿病患病情况、血清中高甘油三酯含量（TG）以及高低密度脂蛋白含量（LDL）是其主要的影响因素。3.1年龄的差异分析表1-3发现，年龄分组是NAFLD重要的的影响因素(P<0.05)。随着年龄的升高，患NAFLD风险会不断增加。表1-1显示，NAFLD高发于45周岁以上的人群，患病率高达47.9%。提示我们45周岁以上的人群为NAFLD高发人群，应重点关注。3.2BMI指数的差异本研究结果显示，患病人群BMI指数均数高于非患病人群（OR=1.68，P<0.05)。提示BMI指数是影响非酒精性脂肪肝的重要影响因素，BMI指数与机体脂肪含量密切相关，多用于评价人体的肥胖程度，因此可推测非酒精性脂肪肝与机体肥胖程度有着紧密的联系。3.3既往病史情况将既往病史高血压、糖尿病纳入到统计模型后分析结果表明，高血压对非酒精性脂肪肝没有显著的影响（OR=1.16，P>0.05）。而以糖代谢紊乱为主要特征的糖尿病则不然，NAFLD患者合并糖尿病发生率高达9%，纳入模型后显示，糖尿病患者发生NAFLD的风险是非糖尿病患者的1.79倍（OR=1.79，P<0.05）。非酒精性脂肪肝的发病机制的二次打击学说中提出，非酒精性脂肪肝发生的首次打击即为机体发生胰岛素抵抗，导致游离脂肪酸含量飙升，这与Ⅱ糖尿病的发病机制相类似，推测同为代谢综合征的两种疾病在某种程度上有一定的相关。9 山西医科大学硕士学位论文3.4相关血脂指标的差异本研究分别对医学上常用的血脂指标甘油三酯（TG）、总胆固醇（CHOL）、高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）在不同人群中的水平进行了对比分析。经多因素分析显示只有TG（OR=1.37，P<0.05）和LDL（OR=1.74，P<0.05）具有统计学差异，提示高TG与高LDL是NAFLD危险因素。吴薇霞等在NAFLD相关危险因素探讨中提及高TG症确为NAFLD的危险因素，TG和LDL等相关血脂指标明显高于普通人群[17]，与本研究结果较为一致。此前研究发现非酒精性脂肪肝(NAFLD)与肥胖、2型糖尿病、高TG症等代谢综合征紧密相关。因此，相关学者指出NAFLD是肝脏组织代谢紊乱的重要表现[18]。全世界一般人群NAFDL患病率高达18％-34％[19]，特别是以高脂类饮食为主的西方国家患病率已突破25%。本次研究结果显示某集团职工非酒精性脂肪肝病患病率高达31.7%，高于全国的平均水平14％-21％。分析其高发病的原因可能与煤矿工人特殊的职业属性，长期处于密闭潮湿的工作环境，打破正常的饮食规律有关。据了解大多数工人存在下班后暴饮暴食的情况，打破了正常的饮食平衡，缺乏相应的体育锻炼。因此，建议相关部门加强NAFLD知识的健康教育，对易发病人群和已发病人群进行生活行为干预，从源头上控制NAFLD发生，并定期组织针对性筛查。引导某集团职工在改善饮食结构的基础上，调整自己的生活作息，适当加强体育煅练，追求健康的生活方式。同时对NAFLD患者展开积极的药物治疗，建立非酒精性脂肪肝治疗档案，可有效遏制NAFLD进一步发展和并发症的发生。4结论某集团患NAFLD职工相比于非NAFLD人群，NAFLD患者的高年龄分组、高BMI指数、既往病史中糖尿病患病情况、血清中高甘油三酯含量（TG）以及高低密度脂蛋白含量（LDL）是其主要的影响因素。10 山西医科大学硕士学位论文第二部分某集团PAEs暴露与非酒精性脂肪肝病的相关性分析1.材料与方法1.1研究对象采用1：1配对病例对照研究的方法根据性别、年龄对95名NAFLD患病人群进行1配对，并采集体检当日清晨容积为2ml的尿液样本。1.2仪器与试剂1.2.1所需仪器岛津LC-30ADUPLC-API4000+液相色谱/质谱联用仪，配电喷雾离子源（美国ABSCIEX公司）；XBR-43干式氮吹仪（上海仪器有限公司）；5702离心机（美国EPPENDORF公司）；G154TW全自动高压锅（厦门致伟有限公司）；902旋涡混合器(江苏南通顺达医用仪器厂)；-20℃冰箱（海尔集团）。1.2.2实验试剂色谱级甲醇、乙腈、甲酸、乙酸、和乙酸铵均购自美国Sigma-Aldrich公司，β-葡萄糖醛酸酶购自广州泰达生物科技有限公司，分析纯氯化钠、无水硫酸镁、丙酮均购自美国aladdin公司。邻苯二甲酸单酯和对羟基苯甲酸酯标准品原液（100ug/ml,纯度>99%）（购于美国sadban-tara公司）。1.2.3实验试剂配制：β-葡萄糖醛酸酶溶液配制：准确称取3.1mgβ-葡萄糖醛酸酶于玻璃配样瓶中，加入500ul纯水，轻微震荡溶解，得β-葡萄糖醛酸酶储备液，保存于-20℃冰箱。乙酸铵缓冲液的配制：准确称取7.7g乙酸铵溶解于100ml纯水中，用乙酸调节PH至5.0，得1mol/l乙酸铵缓冲液。乙酸溶液的配制：称取冰醋酸溶液0.6g，用双蒸水在容量瓶中定容至100ml，数分钟后转移至棕色瓶中，并封口膜。标准品溶液配制：准确量取1ml各标准品原液，甲醇定容，配制（10ng/µl）的单标11 山西医科大学硕士学位论文储备液和内标单标储备液；准确量取1ml各单标储备液于同一50ml容量瓶中，甲醇定容，配置（200pg/µl）的混合标准品工作液和内标工作液，操作步骤同上；用甲醇逐级稀释并配置200.0、100.0、50.0、25.0、10.0、5.0pg/µl的系列混标工作液；分别量取1ml各浓度的混标液并同时量取1ml内标液于各容量瓶中，定容，配制20.0、10.0、5.0、2.5、1.0、0.5pg/µl的系列标准品溶液。1.3尿样前处理1.3.1酶解将尿液样本从超低温冰箱取出，置于冰上静止，待尿样融解后以2000rpm离心2min。用移液枪取100µl尿样上清液于洁净的5ml玻璃管中，先后加入150µl乙酸铵缓冲液，10µl200pg/µl内标工作液，190µl超纯水，20µlβ-葡萄糖酸苷水解酶溶液。将试管置于涡旋震荡器上震荡5s混匀，用封口膜将试管口封好，置于37℃水浴中酶解过夜。过夜后，将试管以2000rpm离心2min，撕开封口膜，用移液枪先后加入10µl乙酸和520µl超纯水，涡旋震荡5s混匀。1.3.2quenchers法液液萃取先后称取450mg无水硫酸镁和150mg氯化钠加入试管，再用移液枪移取1ml丙酮加入试管，涡旋震荡1min，充分混合萃取。将试管以2000rpm离心2min，用移液枪小心吸取900µl上清液于新的洁净玻璃试管中，加入120mg无水硫酸镁和20mgPSA，涡旋震荡30s，充分混合萃取。1.3.3氮吹定容将试管以2000rpm离心2min，用移液枪小心吸取500µl上清液于新的洁净玻璃试管中，将试管置于干式氮吹仪上，40℃，氮吹15min。将试管取出，加入200µl5%甲醇水溶液，涡旋震荡30s充分溶解，以2000rpm离心2min。1.3.4过滤进样用注射器吸取溶液，过0.22µm水系滤膜，过滤后溶液滴加到进样瓶衬管中，质谱进样。1.4高效液相色谱串联质谱技术(HPLC-MS)参数设置12 山西医科大学硕士学位论文1.4.1液相色谱参数：色谱柱：VennusilXBPPhenyl(100×2.1mm,3um)液相条件：流速：0.3ml/min进样量：10µl流动相：A相（0.1%乙酸水溶液）B相（0.1%乙酸乙腈溶液）梯度洗脱程序如下表2-1：表2-1梯度洗脱程序时间（min）流速（ml/min）A相（%）B相（%）0.010.3095520.30955220.302080270.30955320.309551.4.2质谱条件：电喷雾离子源：ESI扫描方式：负离子模式检测方式：MRM扫描时间：150ms气帘气（CUR）：20psi雾化气（GS1）：50psi加热气（GS2）：55psi喷雾电压（IS）：-4.5kV去溶剂温度（TEM）：440℃射入电压（EP）：-10V多反应监测(MRM)模式检测，碰撞气和载气均为高纯氮气，各化合物以及内标化合物的定量离子对，保留时间、碎裂电压和碰撞能等质谱参数见下表2-1-2：表2-2质谱分析参数被测物同位素标记离子产物(m/z)离子产物(m/z)DPCE保留时间/minMMP178.9106.9-35-148.9MEP192.9120.8-35-1410.6MBP221.1121.1-30-2114.2MOP277.0124.7-60-2218.9MBzP258.9106.9-50-1815.2MEHP277.0133.8-55-2218.5MNP291.0140.8-65-2419.01.5质量控制因为实验室相关仪器设备、器皿、试剂尤其是塑料制品所含PAEs本底值较高，在某13 山西医科大学硕士学位论文种程度上实验结果不符合真实情况，因此本实验尽量避免使用有可能含有PAEs干扰物的设备、器皿等。实验所用玻璃器具须经过双蒸水超声清洗，然后在重铬酸钾溶液中浸泡过夜后，再次用双蒸水超声清洗，并用75度烤箱烘干备用。当然在样品处理过程中不可避免的要使用含PAEs干扰物的设备、器皿（枪头、冷存管、EP管等）。为了使测试结果更接近于真实情况，我们在实验过程中加入空白对照组，以测定设备、耗材所含PAEs的本底值，在实测结果中扣除本底值以求还原真实结果。其次在样品前处理quenchers法液液萃取过程中由于操作不能保持完全一致导致误差产生，所以在实验前要对相关人员展开规范化操作培训，并进行考核验收。2.结果2.17种塑化剂代谢产物标准曲线和检测线性范围甲醇逐级稀释混标液，配制200.0、100.0、50.0、25.0、10.0、5.0pg/µl的系列混标工作液，进样到高效液相色谱仪中，在上述4.1色谱条件下，7种邻苯二甲酸酯类代谢产物获得较好的分离并进行分析，对比混合标准液的分离图，出峰顺序依次为MMP、MEP、MNP、MBP、MBzP、MEHP、MOP，色谱图如下图2-1。图2-17种邻苯二甲酸酯类代谢产物色谱图在上述色谱条件下，定量限和以峰面积Y对浓度X绘制标准曲线，见表2-3。14 山西医科大学硕士学位论文表2-37种邻苯二甲酸酯类代谢产物定量限和标准曲线组分线性回归方程相关系数定量限（pg/µL）MMPY=125.37X-1423.640.971.00MEPY=308.83X+1118.720.990.40MBPY=124.87X-102.881.000.50MNPY=262.77X+2101.120.990.10MEHPY=1042,.81X-6450.481.000.20MOPY=90.21X+756.440.990.10MBzPY=193.49X+1074.631.000.102.2邻苯二甲酸酯类代谢产物的检出情况将NAFLD患者根据的年龄、性别、BMI指数等影响因素按1:1配对后对PAEs代谢产物进行分析。由于被测尿液中PAEs代谢产物含量均呈偏态分布，因此采用中位数(四分位数)表示其在人体内的含量，见表2-4。表2-4邻苯二甲酸酯类代谢产物检出率（n=190）PAES类代谢产物MMPMEPMBPMNPMEHPMOPMBzP检出数186189188188159189165检出率（%）97.4199.5898.4398.4283.7799.5386.842.3配对人群塑化剂暴露水平与非酒精性脂肪肝相关性分析对配对人群的一般情况以及血脂相关指标单因素分析结果见表2-5。表2-5配对人群单因素分析结果指标非NAFLD组NAFLD病例组t/Z/χ2P值N9595年龄35.758±7.11434.684±7.301≤35515535-453028≥4514120.3740.832性别男5863女37320.5610.456BMI指数23.101±3.79228.293±2.9335342.000<0.001文化程度：小学及以下231815 山西医科大学硕士学位论文续表2-5中学及专科6465大学及以上8121.4120.494婚姻状况：未婚117已婚8286离异220.9810.612是否患高血压是3656否59398.4240.003是否患糖尿病是33否92920.0001.000睡眠自我评价情况好4749一般4440坏361.2220.543食用油口味倾向清淡2514适中5558油腻15234.6570.091体力活动强度重度146中度2426轻度57633.5820.160甘油三酯（TG）1.191（0.865，1.341）1.832（1.541,2.141）7311.000<0.001总胆固醇(CHOL)4.692（3.964,5.347）5.073（4.673,5.87）7519.000<0.001低密度脂蛋白(LDL)2.951（2.321,3.673）3.367（2.876,3.973）7224.000<0.001高密度脂蛋白(HDL)1.228（1.031,1.685）1.049（0.753,1.483）-13.281<0.001表2-5显示，经年龄、性别匹配后的95对病例组与对照组人群BMI指数，既往病史中高血压患病情况以及相关血脂指标TG、CHOL、LDL、HDL的差异，具有统计学意义（P<0.05）。人群PAEs类代谢产物呈偏态分布，内暴露水平用中位数(p25,p75)表示，经Wilconxon配对符秩检验结果见表2-6。结果显示代谢产物MMP、MEP、MBP差异不明显(P>0.05)，16 山西医科大学硕士学位论文而病例组代谢产物MNP、MEHP、MOP、MBzP明显高于对照组，差异具有显著差异（P<0.05）。表2-6病例组和对照组PAEs类代谢产物暴露水平中位数（P25，P75）pg/µlPAEs类代谢产物NAFLD病例组（95人）对照组（95人）Z值P值MMP2.923（1.387,5.024)2.413(1.001,4.178)-1.2770.202MEP2.692（0.867,10.411）2.742(1.407,7.391)-0.1110.911MBP23.936（8.691,44.978）20.041(11.623,35.324)-0.6720.502MNP0.671(0.487,0.882)0.371(0.202,0.531)-6.1620.000MEHP1.266(0.142,4.141)0.233(0.031,0.485)-4.5440.021MOP0.981(0,1.311)0.385(0,0.602)-7.4500.032MBzP0.841(0.617,1.132)0.111(0,0.388)-7.7610.000组间比较采用Wilconxon配对符秩检验。将表2-5单因素分析有差异的指标包括BMI指数，既往病史中高血压患病情况以及相关血脂指标TG、CHOL、LDL、HDL与代谢产物MNP、MEHP、MOP、MBzP采用向前LR法筛选后纳入到多因素条件Logistic回归模型进行多因素分析，相关赋值参照第一部分，分析结果见表2-7。经Logisitic回归模型校正后，人群高BMI指数(OR=3.16，P<0.05)与NAFLD正相关；其他因素不变时，尿样中MEHP含量(OR=3.08，P<0.05)每增加一个单位NAFLD患病风险提高2.08倍；尿样中MBzP含量(OR=1.58，P<0.05)患病风险则提高0.58倍。表2-7配对人群多因素条件Logistic回归分析结果变量β标准误χ2POR95%Cl下限上限BMI指数1.1490.4935.4830.0093.1611.2058.267MEHP1.1260.4725.6110.0173.0841.2137.813MBzP0.4590.13915.979<0.0011.5831.3611.8283.讨论PAEs是一大类应用极为广泛的新型化合物，越来越多的动物实验以及人群流行病学研究提示PAEs类可能具有多种健康损伤作用。Fester等发现邻苯二甲酸酯类（特别是DEHP、DBP）对啮齿类动物具有类雌激素作用和抗雄性激素作用，可使大鼠体内激素水平失衡，产生“邻苯二甲酸酯综合征（phthalatesyndrome）”[20]，出现生殖器官畸形病变，17 山西医科大学硕士学位论文推测其机制可能与邻苯二甲酸酯类影响大鼠性激素受体活性有关。有研究人员指出在经口饲喂染毒wistar小鼠试验中发现，DEHP可使白蛋白致敏小鼠肺泡中出现嗜酸性粒细胞增多的现象[21]。王立鑫等电镜下观察小鼠肺组织切片发现伴随显著剂量反应关系的迟发相炎症反应，提示DEHP可诱导机体持续发生超敏反应，具有免疫毒性[22]。Kluwe等进行了Fisher大鼠长期诱导毒性试验，发现雌性大鼠和雄性大鼠肝癌发生率显著提高，同时发现大鼠肝细胞瘤样结节阳性[23]。但是DEHP及其代谢物的体外和体内数据不能提供任何明确的证据表明该物质具有遗传毒性效应。动物实验已经证实PAEs类具有明显肝脏损伤作用。衷筱琴等发现DEHP可引起雄性Wistar大鼠肝脏系数增大，肝细胞水肿变性，肝窦变窄，个别细胞出现空泡产生脂肪变性，并有炎细胞浸润[11]。程雪佳发现DEHP及其代谢产物MEHP在小鼠子宫内暴露使得血清TG和TC水平明显上升，诱发小鼠机体肥胖或其他心血管疾病[24]。有关人群方面的研究也发现PAEs类与机体脂质代谢有一定的关联。杨伟浩对哈尔滨市区321名市民的血脂相关指标与邻苯二甲酸酯相关性分析中发现血脂异常组人群外周血清DIBP、DEHP的暴露量远远高于正常组[25]，说明上述两种塑化剂的暴露与机体血脂相关指标异常相关，使机体发生肥胖。由于肝脏是机体脂质代谢的重要器官，肝脏的脂代谢异常不仅可能引起血脂水平的异常，也可以引起肝脏自身的脂肪变性。因此我们推测塑化剂的暴露可能与人群非酒精性脂肪肝的发生之间存在一定的关联性。本课题利用某集团职工的体检资料、问卷资料和生物样品进行了人群塑化剂暴露与非酒精性脂肪肝关联性的研究。本课题选择95例非酒精性脂肪肝职工和95例按照年龄性别匹配的对照职工进行了研究，共测定了190名某集团职工的尿液样品，发现PAEs代谢物检出率较高，除MEHP外均在85%以上，较高的检出率反映出该集团职工普遍暴露于PAEs塑化剂污染物。但本次所观察人群七种代谢产物检出含量中位数远低于代娟娟等所报告的结果[26]，他们用固相萃取-高效液相色谱方法对低年级在校200多名名儿童尿液样品MEP(233.16µg/L)、MBP(67.47µg/L)、MBzP(52.96µg/L)、MEHP（40.8µg/L）的含量。分析其可能的原因是低年级儿童心智不健全、缺乏个人卫生意识，并且大多数儿童玩具中含有大量类高分子聚合物材料，玩完玩具后不洗手就直接接触口鼻或者进食，这就大大增加了PAEs儿童暴露风险。相较而言本次实验人群均为成年人，是相对集中的职业群体，大多数人在工作期间三餐均在单位食堂进行（较少使用点外卖或者其他进食途径），据了解某集团职工食堂使用的是金属餐盘，经食品途径接触塑料制品的机会相对较少，因此检出水平较未成年人低很多。丹麦学者Fredefiksen对健康丹麦男青年尿液中塑化剂代谢产物MEP、MEHP做了相18 山西医科大学硕士学位论文关检测[27]，检出率显示MEP为43.3%，MEHP为83.3%，其中DMP检出浓度低于检出限，MEHP检出几何均数为7.88µg/L，高于本实验检出水平，可能的原因是地理区域和不同种族和文化的差异导致对塑料制品使用量不同。本研究结果显示，Logisitic回归模型校正后病例组与对照组尿液中PAES类代谢产物差异具有统计学意义，人群尿液中MEHP含量(OR=3.08，P<0.05)和MBzP含量(OR=1.58，P<0.05)每增加一个单位NAFLD患病风险提高2.08和0.58倍。本研究结果与杨伟浩[25]发现的血脂异常组人群外周血清DIBP、DEHP、DBzP的暴露量远高于正常组的结果相吻合，与代娟娟等[26]对肥胖儿童尿液中PAEs类代谢产物分析中发现经性别与年龄校正后DBP与DEHP代谢产物MBP、MEHP的含量与儿童体脂含量正相关的结果相一致，推测邻苯二甲酸酯类塑化剂体内暴露很可能会影响机体肝脏正常的脂质代谢，使机体发生脂质代谢紊乱，影响人类的健康。DEHP是被人类所熟知的适用范围最广的一类塑化剂，被世界卫生组织确定为环境内分泌干扰物之一，甚至被列为人类可能致癌物[28]。本次测定结果DEHP代谢产物MEHP检出率较低，病例组检出中位数为1.26µg/L，对照组为0.23µg/L，可能是由于DEHP不易在机体蓄积，清除效率较高。有学者指出肠细胞内存在固有脂质结合蛋白可与MEHP结合穿透肠上皮细胞进入机体血液循环，之后经过肝脏水解酶和细胞色素P450的联合作用下发生葡萄糖醛酸化，代谢成为单体代谢产物5-OHMEHP和5-OXOMEHP[29]。这两种单体在尿液中的含量大大超过了MEHP的含量，但是由于实验技术和设备有限，不能使用现有条件准确定性定量这两类单体代谢物，较为遗憾，还待进一步更新实验条件和设备技术准确测定这两类单体含量，为DEHP内暴露水平提供准确依据。作为低分子PAEs化合物重要代表DBP区别于高分子聚合物之处，在于其易经消化道摄入，且呼吸道吸入以及皮肤摄入也是其暴露的有效途径。本次测定结果显示，人群DBP代谢物MBP含量很高，达到23.936（8.691,44.978）pg/µl。可能与该人群长期所处密闭潮湿的井下环境有关[30]。本项目所研究的人群为山西省某煤矿集团的职工，其中煤矿工人占有较高的比重，而煤矿工人长期井下作业，空气不流通，加之高温环境，机械设备以及安全设施中的低分子化合物DBP很容易渗透到空气中并长期滞留于井下，使得煤矿工人长期接触接触DBP，因而其代谢产物MBP含量较高。对BBzP研究多见于其生殖毒性。Lee等构建的BBzP暴露动物模型发现，雄性啮齿动物在生殖系统发育的重要时期暴露于BBzP等塑化剂会干扰雄激素信号通路，诱发生殖系统发育畸形[31]。陈晨等在对孕妇体内PAEs暴露危险因素研究中提及BBzP暴露水平与19 山西医科大学硕士学位论文使用化妆品频率正相关，与新生儿身长负相关[32]。本研究发现BBzP暴露可能会影响机体正常的脂质代谢，关于其机制，还需在后续细胞实验中进一步探讨。为了最大限度反映人群的真实塑化剂暴露水平，本次实验采用了多种措施进行质量控制，其中样品的前处理方面，采用葡萄糖醛酸酶水解尿液中代谢产物，极大程度上还原了机体生化代谢情况，可以更为真实地还原机体的暴露情况，提高实验的准确性。另外采用了最新提出的quenchers法液液萃取[33]，该方法可以极大降低溶剂提取成本,在实验耗材方面也做到了更好的节约，并且大大缩短了检测时间，同时拥有较高的灵敏度。PAEs属中性化合物，有亲水亲脂双重特性，本次实验优化了萃取方法，获得了更稳定的回收率，尤其是对中性和疏水性化合物MMP和MEP回收率和精度改善明显。第三方面，本次采用高效液相色谱串联质谱(HPLC—MS)法，经液相色谱分离，通过专业接口对接入质谱仪。根据被轰击后离子的不同质核比，并参照各组成成分离子的选择离子扫描、保留时间等多种参数做准确定性，根据标物所绘制的标准曲线进行精准定量分析[34]。优化了机体体液中微量化合物PAEs代谢产物的测定方法，保证高灵敏度、高检测效率、较低检测限，实现了多种代谢产物的有效分离和准确定性定量分析。本次研究也有诸多不足。例如：(1)人群数据来源为成人并不是全人群，缺少有关未成年人的数据，并且此次实验人群有着明显的职业特征，并不能完全估计普通人群的塑化剂内暴露水平。(2)本次实验技术和设备有限，不能使用现有条件准确定性定量DEHP单体代谢物5-OHMEHP和5-OXOMEHP，还待进一步更新实验条件和设备技术准确测定这两类单体含量，为DEHP内暴露水平提供准确依据。(3)本实验经费有限，样本量较少；实验设计采用病例对照研究无法确定暴露与疾病发生的时间先后顺序，因此难以确定两者的因果联系。(4)虽然对相关混杂因素进行了匹配，还是避免不了其他潜在因素的影响，因此本课题存在一定的局限性，在后续的研究过程中须进一步改进。值得注意的是，现如今塑料制品已经遍布在我们生活的各个角落，PAEs与高分子聚合物之间并不是共价键稳定结合，而是并不牢固的物理结合，伴随着环境改变和时间推移，这类不稳定的化学物质会逐渐从材料中逸出，这类物质对我们人类健康威胁甚大，应该引起我们的高度警惕。欧盟国家于1999年就开始在某些塑料产品中限制使用邻苯二甲酸酯类，建议相关部门参考其他国家的做法在保持经济稳步增长的基础上进一步限制此类化合物的使用。20 山西医科大学硕士学位论文4．结论1.某集团PAEs较高的检出率表明该人群普遍暴露于PAEs污染物。2..DEHP、BBzP等塑化剂暴露可能是机体患NAFLD的危险因素，使机体发生脂质代谢紊乱。参考文献[1]PeterTe.AssociationofPlasticManufacturersinEurope(APME).Ananalysisofplasticsproduction,demandandrecoveryinEurope.APME,Brussels,Belgium:AssociationofPlasticsManufacturers,2006.[2]SouhradaL.Reusablesrevisitedasmedicalwasteaddsup.Hospitals1988,62:82.[3]JohnsLE,FergusonKK,SoldinOP,CantonwineDE,Rivera-GonzálezLO,DelToroLV,CalafatAM,YeX,AlshawabkehAN,CorderoJF,MeekerJD.Urinaryphthalatemetabolitesinrelationtomaternalserumthyroidandsexhormonelevelsduringpregnancy:alongitudinalanalysis.ReprodBiolEndocrinol,2015,13:4.[4]CDC.Thirdnationalreportonhumanexposuretoenvironmentalchemicals[R].USDepartmentofHealthandHumanServices,CentersforDiseaseControlandPrevention,NationalCenterforEnvironmentalHealth,DivisionofLaboratorySciences,Atlanta,GA,2005.[5]董夫银,闫杰.欧盟及美国禁用邻苯二甲酸酯的法规及其出台始末[J].检验检疫学刊,2006,16(3):78-80.[6]孟雪征,牛贵龙,曾明,柳学速,韩玉伟,曹相生.增塑剂邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯的危害、分布及生物降解.生态环境学报,2014,23(8):1384-1389.[7]赵亚辉，王小逸，林兴桃，等.邻苯二甲酸酯类化合物的体内代谢及毒性研究进展[J].环境与健康杂志，2010,27（2）：184-187.[8]曹男,林连捷,郑长青,等.脂肪肝相关危险因素的研究[J].中国全科医学,2013,16(10):1115-1119.[9]TilgH,MoschenAR,RodenM.NAFLDanddiabetesmellitus[J].NatureReviewsGastroenterology&Hepatology,2017,14(1):32.[10]DayCP,JameOF.Steatohepatitis:ataleoftwo“hits”?[J].Gastroenterology,1998,114：842-845.[11]衷筱琴,蔡红平,万红萍,肖雯.邻苯二甲酸二(2－乙基己基)酯对大鼠不同脏器的损伤.环境与健康杂志,2009,26(3):212-214.21 山西医科大学硕士学位论文[12]DimastrogiovanniG,CórdobaM,NavarroI,JáureguiO,PorteC.AlterationofcellularlipidsandlipidmetabolismmarkersinRTL-W1cellsexposedtomodelendocrinedisrupters.AquatToxicol.2015,165:277-285.[13]ChenH,ZhangW,RuiBB,YangSM,XuWP,WeiW.Di(2-ethylhexyl)phthalateexacerbatesnon-alcoholicfattyliverinratsanditspotentialmechanisms.EnvironToxicolPharmacol.2015,42:38-44.[14]国际糖尿病联盟（IDF）MS全球共识定义.中华糖尿病杂志[J].2005,13(3):174-174.[15]黄志平,张斌,邵桂霞,等.超重、肥胖与非洒精性脂肪性肝炎(615例非洒精性脂肪性肝炎临床资料分析)[C]/中国健康管理科技发展论坛暨2011年广东省医学会体检医学/健康管理学学术年会.2011.[16]中华肝脏病学会脂肪肝和酒精性肝病学组.非酒精性脂肪性肝病诊断标准[J].肝脏,2002(04):290.[17]吴翠霞．非酒精性脂肪肝相关危险因素的调查分析[J]．重庆医学，2011,04:364—365．[18]徐磊.非酒精性脂肪性肝病与内分泌代谢紊乱的关系的研究[D].浙江大学,2014.[19]XiaoJ，GuoR，FungML，eta1．Therapeuticapproachestonon—alcoholicfattyliverdisease：pastachievementsandfuturechallenges[J]．HepatobiliaryPancreatDisInt，2013，12(2)：125—135．[20]FesterPM,GrayE,LeffersH.Disruptionofreproductivedevelopmentinmaleratoffspringfollowinginuteroexposuretophthalateesters[J].2009,29:140-147.[21]HansenJS,LarsenST,PoulsenLK,NielsenGD.Adjuvanteffectsofinhaledmono-2-ethylhexylphthalateinBALB/cJmice.Toxicology,2007,232(1-2):79-88.[22]王立鑫，杨旭.邻苯二甲酸酯毒性及健康效应研究进展[J].环境与健康杂志，2010,27（3）：276-281.[23]KluweWM,HasemanJK,DouglasJF.Thecarcinogenicityofdietarydi(2-ethylhexyl)phthalate(DEHP)inFischer344ratsandB6C3F1mice[J].2010,12:797-815.[24]程雪佳.环境内分泌干扰物宫内暴露对子代小鼠肥胖的影响及作用机制研究[J].北京协和医学院硕士论文.[25]杨伟浩,王艳梅,徐宁,等.邻苯二甲酸酯暴露与血脂异常的关系研究[J].中国工业医学杂志,2017(1):9-13.[26]代娟娟.尿液中邻苯二甲酸酯代谢物的分析及与儿童肥胖相关性研究[D].上海交通大学,2014.[27]FrederiksenH，JorgensenNandAnderssonA-M．Correlationsbetweenphthalatemetabolitesinurine，serum，andseminalplasmafromyoungDanishmendeterminedbyisotopedilution22 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山西医科大学硕士学位论文邻苯二甲酸酯类研究进展摘要邻苯二甲酸酯类塑化剂在世界范围内被广泛使用，通过多种途径等摄入人体，并且逐渐累积并可分解成相应的代谢产物,对人类的健康构成较大威胁，大量研究表明其对人体可造成致畸、致癌、致突变及甚至生殖毒性作用等诸多健康危害。本文就邻苯二甲酸酯类塑化剂体内代谢、毒性效应以及分析检测方法进行综述。关键词：邻苯二甲酸酯类；体内代谢；毒性效应；分析检测方法PhthalatesResearchProgressAbstractPhthalatesarewidelyusedthroughouttheworldandareingestedintothebodythroughdiet,respiratorypathways,skincontact,etc.,andtheygraduallyaccumulateanddecomposeintocorrespondingmetabolites,makingthemmorehealthytohumanhealth.Largethreats,alargenumberofstudieshaveshownthatitcancauseteratogenic,carcinogenic,mutagenicandevenreproductivetoxiceffectsonthehumanbodyandmanyotherhealthhazards.Thisarticlereviewstheinvivometabolismandtoxicityeffectsofphthalateplasticizersaswellasanalyticalmethods.Keywords:phthalates;invivometabolism;toxiceffects;analyticalmethods20世纪人类社会的最大进步莫过于使用塑料制品使人类的日常生活得到了翻天覆地的改变。塑料制品可以无限次重复使用，其分子是由小分子单体网络结合而成一起形成的大分子。目前，全球有超过20种不同使用类型的塑料制品[1]。塑料制品对社会有利影响集中体现在公共卫生领域。塑料具有成本效益，几乎不需要能量生产，并且是轻量级和生24 山西医科大学硕士学位论文物相容性的,这使其成为一次性使用的理想材料。同时有数据表明[2]，目前包括85％的医用器材中都含有塑料成分。塑化剂的使用增强了高分子聚合材料的柔韧性和可塑性。20世纪末，全球塑化剂市场持续走高，我国此类化合物的消耗量占据世界总体消费量的20%以上。全球普遍使用的是邻苯二甲酸酯(PhthalicAcidEsters，简称PAEs)。PAEs是邻苯二甲酸形成的酯类化合物的总称，使用此类化学剂可增加塑料制品的韧性和可塑性，有效提升塑料强度。在我国诸多PAEs中，DEHP使用最多。DEHP在塑料中的含量在1%～40%之间。DEHP被广泛应用于食品包装、建筑材料、化学药品、电子设备、服装纤维、PVC管道等各种产品中[3]。PAEs具有特殊的理化性质，其与高分子材料并不是稳定的共价结合。在各种因素共同作用下，逐渐从高分子材料中转移到环境介质中，并且可在人体内逐渐累积并可分解成相应的代谢产物,进而危害人体健康。因此，PAEs已经成为重要的环境污染物之一，受到人们的广泛关注。邻苯二甲酸二（２-乙基己）酯［Di(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP］占据了增塑剂的半壁江山，被WHO认定为环境内分泌干扰物，甚至被列为人类可能致癌物[4]。DEHP主要通过消化道摄入组织，在机体肝脏中进行代谢，少部分由呼吸道进入。机体肠道中存在可以大量水解DEHP的水解酶，经水解酶作用后的DEHP大部分转化为邻苯二甲酸单乙基己基酯（Monoethylhexylphthalate，MEHP）。Carbone[5]等研究表明肠细胞内存在固有脂质结合蛋白可与MEHP结合进入肠上皮细胞进入机体血液循环。之后经过肝脏水解酶和细胞色素Ｐ450的联合作用下发生葡萄糖醛酸化，代谢成为单体代谢产物５-OHMEHP和５-OXOMEHP，最后经泌尿系统以葡萄糖醛酸结合体的形式排出机体，在肠道中未被完全水解的DEHP多以原型从粪中排出。并且肠道对于肝脏的DEHP清除率较高，不过也提出肝脏对于肠道DEHP清除的时间效应更高。有关研究表明，DEHP不易在机体蓄积，清除效率较高。Hopf等[6]发现DEHP可以经皮肤进入机体，经相关作用在局部代谢为５-OXOMEHP。一、塑化剂的危害目前研究表明，PAEs酯化物经由呼吸道、消化道和皮肤等途径进入机体，对人体造成致畸、致癌、致突变及甚至生殖毒性作用等诸多健康危害。越来越多的动物毒理学以及人群流行病学研究提示DEHP可能具有多种健康损伤作用，并且，在人体多种生物样品中均能检出PAEs。FesterPM等在啮齿类动物染毒试验中发现邻苯二甲酸酯类（特别是DEHP、DBP）具有类雌激素作用和抗雄性激素作用[7]。实验动物伴有生殖器官畸形病变，其作用25 山西医科大学硕士学位论文机制涉及到邻苯二甲酸酯类化合物对大鼠性激素受体功能显著的干扰作用。此外，有研究人员[8]指出在经口饲喂染毒wistar小鼠试验中发现DEHP可使白蛋白过度致敏小鼠肺泡中出现嗜酸性粒细胞增多的现象。并且诱导其体内加速生成特异性抗体IgG,电镜下观察小鼠肺组织切片发现伴随显著剂量反应关系的迟发相炎症反应，提示DEHP可增强机体免疫应答能力，诱导机体持续发生超敏反应，具有免疫毒性。DEHP甚至可能具有一定的致癌性。Kluwe等在对Fisher大鼠和B6C3F1长期慢性毒性试验中发现，雌性大小鼠和雄性大鼠肝癌发生率显著提高，同时发现大鼠肝细胞瘤样结节阳性[9]。但是DEHP及其代谢物的体外和体内数据不能提供任何明确的证据表明该物质具有遗传毒性效应，不能排除细胞毒性作用可能导致散发性阳性结果。啮齿类动物长期诱导毒性实验中，DEHP诱导肝腺瘤和癌，单核细胞白血病以及从胃的肠嗜铬细胞和胰腺的胰腺和胰岛细胞发展而来的肿瘤，过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激活的种属差异，值得注意的是表现在过氧化物酶体系扩增与机体低反应性等方面被反复研究。最近的研究[10]也证实了这一点。据了解，PPARα激活的肝脏中的过氧化物酶体增殖物在啮齿动物中与人类无关。这是因为首先PPARα以极低浓度存在于人体内（大鼠和小鼠肝脏中的浓度为1％至10％），再者，由PPARα激活反应性较弱。通过激活PPARα的其他基因，例如那些用于调节细胞增殖或细胞凋亡的情况下，相关研究数据较少未能建立任何定量关系[11]。自2002年以来用转基因PPARα缺失小鼠阐明致癌机制的文献以来已有的研究证实了先前的假设：首先，在不依赖于PPARα的转基因小鼠中，DEHP诱导肝脏肿瘤，再者，这些研究表明肝细胞或过氧化物酶体的增殖并不是肝癌发生的单一因素。尽管PPARα的激活及其后续效应是DEHP毒性作用的关键机制，但许多体外和体内的机制研究表明，大量其他分子机制和信号通路是造成大鼠肝脏致癌作用的原因。DEHP虽具有肿瘤促进作用，但没有明确的引发机制，而且目前没有新的机制数据可以用来改变之前对DEHP致癌性的评估。有相关动物实验结果提示PAEs类具有肝脏损伤效应。衷筱琴等发现过量摄入DEHP可导致雄性Wistar大鼠的肝脏质量增加，并伴有细胞水肿样变。同时镜下可发现肝脏细胞内有脂质蓄积，伴有炎症细胞[12]。Dimastrogiovanni[13]等也发现DEHP能够引起虹鳟鱼肝细胞脂肪积累和脂肪酸合酶（FAS）表达升高。Chen[14]等发现高脂饲喂DEHP染毒大26 山西医科大学硕士学位论文鼠可以促进其肝脏的脂肪积累。程雪佳发现DEHP及其代谢产物MEHP在小鼠子宫内暴露使得血清TG和TC水平明显上升，诱发小鼠机体肥胖或其他心血管疾病。有关PAEs类污染与机体脂质代谢的相关人群研究有很多。杨伟浩[15]对哈尔滨市区321名市民的血脂相关指标与邻苯二甲酸酯相关性分析中发现血脂异常组人群外周血清DIBP、DEHP的暴露量远远高于正常组，说明上述两种塑化剂的暴露与机体血脂相关指标异常相关，使机体发生肥胖。国外也有学者[16]研究表明PAES类塑化剂暴露与人体腰臀比和体重指数正相关，而且与导致女性糖尿病的发病率上升有关。众所周知，不同物种间的代谢方式有着明显的差异。其可能的原因是不同的酶模式起作用，同一物种的新陈代谢也取决于年龄、性别、个体间差异、免疫水平、DEHP暴露量、接触途径和其他因素。欧盟风险评估报告认为，除大鼠葡萄糖醛酸化不存在外，没有证据表明其他代谢途径在物种间存在显著差异。其他作者认为物种特异性毒代动力学是物种间毒性效应显著差异的原因。因此，现有的毒代动力学数据无法解释DEHP毒性的物种特异性差异，并且不足以最终评估动物实验中观察到的效应与人类的相关性[17]。二、塑化剂的相关分析检测方法索氏提取，液液萃取（LLE），固相萃取（SPE）是早期前处理方法，因其定性和定量能力不成熟，现阶段使用较少。荧光光谱傅里叶变换红外光谱法虽然具有较强的定性能力，但是由于PAEs种类较为庞杂，而此方法无法达到定量测定，难以区分被测物种类，因此现阶段基本很少提及。现阶段对PAEs分离和测定使用较多的是色谱分析。栾琳等人用毛细管气相色谱法测定PAEs中16种邻苯二甲酸酯类杂质含量，以邻苯二甲酸二乙酯标准品为对照品，建立了毛细管气相色谱法[18]，同时检测邻苯二甲酸二乙酯中16种邻苯二甲酸酯类杂质检测方法。杨悠悠[19]等人采用液液萃取及基质分散固相萃取结合气相色谱-质谱联用(GC-MS)方法，探索出测定饮料、牛奶、白酒类饮料中16种邻苯二甲酸酯类塑化剂的分析方法。并且将这种方法延伸到塑化剂迁移研究中，较为准确得测定处食品包装袋中16种邻苯二甲酸酯类塑化剂的迁移量。27 山西医科大学硕士学位论文气相色谱法因具有高定性性能并且兼具定量及定性双重功能，在探索到正确的检测流程的情况下对被测物质较为敏感，易于区分低浓度被测物，拥有较高灵敏度，检出限较低，在分析化学和基础医学领域被广泛使用。然而，气相色谱法本身存在短板，样品回收率偏低，还需完善收集被测物中所含的干扰物质，进行相应质量控制，并且相关操作较为复杂，所需仪器设备不易移动，价格不菲，无法实现现场操作。同样液相色谱-质谱（LC-MS）具有多残留化合物相关检测效能，同时拥有高灵敏度和高特异度，并且兼具定性和定量双重特性，预测试纯化操作较为简便，近几年也得到了充分发展，在测定环境化合物中广泛使用。黄珂和赵东豪等[20]准确测定了水环境中多种PAEs，平均回收率>80％，检出限较低。值得注意的是，现如今塑料制品已经遍布在我们生活的各个角落，PAEs与高分子聚合物之间并不是共价键稳定结合，而是并不牢固的物理结合，伴随着环境改变和时间推移，这类不稳定的化学物质会逐渐从材料中逸出，这类物质对我们人类健康威胁甚大，应该引起我们的高度警惕。欧盟国家于1999年就开始在某些塑料产品中限制邻苯二甲酸酯类，建议相关部门参考其他国家的做法在保持经济稳步增长的基础上进一步限制此类化合物的使用。1.AssociationofPlasticManufacturersinEurope(APME).Ananalysisofplasticsproduction,demandandrecoveryinEurope.APME,Brussels,Belgium:AssociationofPlasticsManufacturers,2006.2.SouhradaL.Reusablesrevisitedasmedicalwasteaddsup.Hospitals1988;62:82.3.孟雪征,牛贵龙,曾明,柳学速,韩玉伟,曹相生.增塑剂邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯的危害、分布及生物降解.生态环境学报,2014,23(8):1384-1389.4.InternationalAgencyforResearchonCancer(IARC)AgentsdasssifiedbytheIARCMonographs,Volume1-105[EB10L],France:IARC,2012[2014-02-08].5.ChoiK,JooH,CampbellJLJr,AndersenME,ClewellHJ3rd(2013)Invitrointestinalandhepaticmetabolismofdi(2-ethylhexyl)phthalate(DEHP)inhumanandrat.ToxicolInVitro27:1451–1457.6.HopfNB,BerthetA,VernezD,etal.Skinpermeationandmetabolismofdi(2-ethylhexyl)phthalate(DEHP)[J].ToxicologyLetters,2014,224(1):47.7.FESTERPM,GRAYE,LEFFERSH.Disruptionofreproductivedevelopmentinmaleratoffspringfollowinginuteroexposuretophthalateesters[J].2010,12:140-147.28 山西医科大学硕士学位论文8.HansenJS,LarsenST,PoulsenLK,NielsenGD.Adjuvanteffectsofinhaledmono-2-ethylhexylphthalateinBALB/cJmice.Toxicology,2007,232(1-2):79-88.9.KLUWEWM,HASEMANJK,DOUGLASJF.Thecarcinogenicityofdietarydi(2-ethylhexyl)phthalate(DEHP)inFischer344ratsandB6C3F1mice[J].2010,12:797-815.10.IARC(2012)Di(2-ethylhexyl)phthalate,IARCmonographsontheevaluationofthecarcinogenicriskofchemicalstohumans,Volume101,IARC,Lyon,FR,149–284.11.KlaunigJE,BabichMA,BaetckeKP,CookJC,CortonJC,DavidRM,DeLucaJG,LaiDY,McKeeRH,PetersJM,RobertsRA,Fenner-CrispPA(2003)PPARαagonist-inducedrodenttumors:modesofactionandhumanrelevance.CritRevToxicol33:655–780.12.衷筱琴,蔡红平,万红萍,肖雯.邻苯二甲酸二(2－乙基己基)酯对大鼠不同脏器的损伤.环境与健康杂志,2009,26(3):212-214.13.DimastrogiovanniG,CórdobaM,NavarroI,JáureguiO,PorteC.AlterationofcellularlipidsandlipidmetabolismmarkersinRTL-W1cellsexposedtomodelendocrinedisrupters.AquatToxicol.2015,165:277-285.14．ChenH,ZhangW,RuiBB..Di(2-ethylhexyl)phthalateexacerbatesnon-alcoholicfattyliverinratsanditspotentialmechanisms.EnvironToxicolPharmacol.2015,42:38-44.15.杨伟浩,王艳梅,徐宁,等.邻苯二甲酸酯暴露与血脂异常的关系研究[J].中国工业医学杂志,2017(1):9-13.16.HatchEE,Nelson,JW,Qureshi,MM,etal.Associationofurinaryphthalatemetaboliteconcentrationswithbodymassindexandwaistcircumference;across-sectionalstudyofNHANES,date.1999-2002[J]EnvironHealth208,7(1):1-15.17.ChenH,ZhangW,RuiBB,YangSM,XuWP,WeiW.Di(2-ethylhexyl)phthalateexacerbatesnon-alcoholicfattyliverinratsanditspotentialmechanisms.EnvironToxicolPharmacol.2015,42:38-44.18.栾琳，赵霞，杨锐，等.毛细管气象色谱法测定邻苯二甲酸二乙酯中16种邻苯二甲酸酯类杂质含量[J].中国药品标准，2013,14(2):136-139.19.杨悠悠，谢云峰，田菲菲，等.常见食品中邻苯二甲酸酯类增塑剂含量及食品包装材料中邻苯二甲酸酯类增塑剂迁移量的测定[J].色谱，2013,{7):674-678.20.黄珂,赵东豪,黎智广,等.高效液相色谱-串联质谱法测定水中邻苯二甲酸酯[J].海洋环境科学,2011,30(4):590-593.29 山西医科大学硕士学位论文致谢时光如白驹过隙，转瞬间三年的硕士生活已经接近尾声。借此机会谨向我的导师白剑英副教授致以由衷的谢意。您的高尚品格就像这四月的春风让我收获满满。感谢您提供了优质的科研资源和良好的学习环境，让我在知识的海洋里自由徜徉。同时也感谢您在思想上给予很大的引导，让我对环境卫生科研工作有了深刻的认知，让我的研究生生活充实并快乐，您的高尚人格和严谨的科研思维将是我今后学习的榜样。本教研室张志红教授、张红梅副教授、梁瑞峰副教授、夏娜老师、秦小江老师以及公卫学院其他老师在本人科研探索过程中给予了无私帮助和热忱指导，在此表示由衷的感激。感谢刘艳飞师姐、王盼师姐、张艳师姐、李耀福同学、贺真师妹、姜雪霞师妹还有教研室其他兄弟姐妹给予我的鼎力帮助，我们友谊长在。求学数载，更应该感谢我的家人，感恩你们这么多年的付出与关怀，愿你们身体健康，万事胜意。感谢审阅组和答辩组的各位专家提出的宝贵意见，为我今后科研道路开拓了方向。30 山西医科大学硕士学位论文个人简历一、基本情况张超，男，1994年11月生，汉族，山西省汾阳市人。专业：劳动卫生与环境卫生学，主要研究方向：环境污染物的肝脏毒性。二、教育背景2010年9月-2015年7月，山西医科大学，公共卫生学院，预防医学专业，学士2015年9月-2018年7月，山西医科大学，公共卫生学院，劳动卫生与环境卫生学专业，硕士三、攻读硕士期间发表文章张超,白剑英,王东新,等.甲醛对人肝癌细胞株HepG2内质网应激相关Bip和CANXmRNA及蛋白表达水平的影响[J].癌变畸变突变,2017,29(5).31