猪流行性腹泻病毒

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1、猪流行性腹泻病毒分离的研究报告汇报人：刘腾飞科前质量管理部－病毒组猪流行性腹泻病毒猪流行性腹泻病毒猪流行性腹泻毒一般概况以及国内外研究进展猪流行性腹泻病毒的分离分离猪流行性腹泻病毒的讨论猪流行性腹泻病毒一、猪流行腹泻病毒的一般概况及国内外研究进展1.猪流行性腹泻病毒一般概况。猪流行性腹泻病毒(Porcineepidemicdiarrheavirus，PEDV)，属于尼多病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。感染动物之后主要以腹泻、呕吐、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征的一种高度接触性

2、肠道传染病。它是引起10日龄仔猪100％死亡的传染病毒之一，每年给我国养猪业造成20～30亿左右的经济损失。猪流行性腹泻病毒2.猪流行性腹泻病毒的基因结构特征PEDV基因组是单股正链具有感染性的RNA，与其他冠状病毒相似，其基因组5′端有一个帽子结构(cap)，3′端有1个Poly(A)尾，基因组全长为28033nt。基因组序列包括6个ORF，从5′～3′端依次为编码复制酶多聚蛋白1ab(pp1ab)、纤突蛋白(S)即糖激化纤突蛋白、ORF3蛋白、小膜蛋白(E)、膜糖蛋白(M)即糖激化囊膜和核衣壳蛋白(N)的基因。猪流行性腹泻病毒猪流行性腹泻病毒3.PED

3、V的编码蛋白及其功能。（1）非结构蛋白及其功能：a.复制酶多聚蛋白1ab(pp1ab)它是由基因1编码的一个多功能蛋白质，预测分子质量为753ku，有13个预测蛋白酶切割位点的非结构蛋白，经共转译处理后产生与病毒基因组复制相关的一系列蛋白质，主要功能包括负链RNA、前导RNA、sgmRNA和子代病毒RNA的转录作用以及对多聚蛋白切割产生具有功能产物的蛋白酶切割作用。另外，ORF1a编码蛋白还含有3个转膜域(TM)。ORF1b主要编码RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)，同时有3个蛋白结构域分别是锌指蛋白域(Z)也称金属结合域、螺旋酶域(Hel)和保守序列域

4、(C)。猪流行性腹泻病毒b.ORF3蛋白：ORF3蛋白是编码分子质量为25.3ku的非结构蛋白，通过限制性片段长度多态性分析适应Vero细胞的弱毒PEDV和野毒PEDV的ORF3，发现ORF3与病毒毒力有关.猪流行性腹泻病毒（2）PEDV结构蛋白及其功能a.S蛋白：S蛋白是由1383个氨基酸组成、分子质量为180ku～220ku、位于病毒粒子表面的纤突糖蛋白，在病毒粒子与细胞表面受体结合后通过膜融合侵入宿主细胞和在感染宿主体内介导中和抗体产生的过程中发挥重要生物学作用。目前，PEDVS蛋白中和表位在以烟草花叶病毒为载体的无烟碱烟草植物中得到了成功表达，表达

5、蛋白免疫接种后，对仔猪具有良好的保护作用，为PEDV转基因植物疫苗研究奠定了物质基础。猪流行性腹泻病毒b.N蛋白：N蛋白是由441个氨基酸组成、分子质量为55ku～58ku、磷酸化的核衣壳蛋白，与病毒基因组RNA相互缠绕形成病毒核衣壳，N蛋白有3个相对保守的结构域，位于中间的是一个能与病毒RNA前导序列结合的RNA结合域，N蛋白在PEDV的结构蛋白中所占比例最大，在感染的细胞中能得到大量表达。猪在感染PEDV的早期，体内就能产生抗N蛋白的高水平抗体，又鉴于其冠状病毒N蛋白保守性强，所以利用N蛋白来建立PEDV分子生物学诊断技术具有很好的应用前景。猪流行性腹

6、泻病毒C.M蛋白：M蛋白是由226个氨基酸组成、分子质量为27ku～32ku的膜糖蛋白，在病毒粒子的组装和出芽过程中具有重要作用。在补体存在的条件下，抗M蛋白囊膜外抗原表位的单克隆抗体能中和病毒的感染性。另外，M蛋白能介导机体产生α干扰素，所以M蛋白可以作为PEDV基因工程疫苗的候选抗原。猪流行性腹泻病毒d.E蛋白：E蛋白是由76个氨基酸组成、预测分子质量为8.8ku、位于病毒囊膜上的小包膜蛋白，对病毒的组装和出芽是必要的。目前，研究者将PEDV的E基因和M基因导入甲病毒载体(pSFV)，在BHK-21细胞中得到了成功的表达，为进一步探讨E蛋白和M蛋白在抗

7、病毒中的作用奠定了基础。猪流行性腹泻病毒N蛋白（Nucleoprotein)、M蛋白（Membraneprotein)、SM蛋白（smallmembraneprotein)和S蛋白（Spikeprotein)，位于SM基因与S基因之间的ORF，命名为ORF3，编码未知功能且具有多态性的产物。猪流行性腹泻病毒4.PEDV的临床症状猪流行性腹泻的病原是一种冠状病毒，与传染性胃肠炎的病原相似。病毒破坏小肠茸毛，减小营养吸收面积，还导致体液损失，造成脱水。易感群遭病毒侵入2～3周内即可产生很强的免疫，病毒就会从猪群消失，尤其是较小的猪群（<300头母猪）。仔猪也可

8、通过初乳获得免疫。易感群初次接触病原时会爆发急性腹泻，这种情况下母