病毒感染实验诊断

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1、病毒感染实验诊断一般原则是特异敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能感染的病毒。然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。1.对潜伏期短，发病时尚无抗体产生，可选择测定病毒颗粒、病毒抗原或核酸。2.对潜伏期超过十天的感染，可检测特异性的IgM抗体来进行早期快速诊断，及区别初次和再次感染。3.对可在体内形成持续感染或潜伏感染的病毒，可检测急性期和恢复期双份血清的IgG抗体有无4倍以上升高，或直接检测病毒核酸。4.对原因不明或有新病毒感染时，应采集标本进行病毒分离，同时应采取双份血清以确认分离的病毒为病原体。5

2、.对同一症状可有多种病毒引起的情况，应同时检测几种相关病毒的病毒颗粒、抗原或抗体，6.对由多个型别组成的病毒可测定它们的共同抗原。第一节标本采集与运送一、标本的采集1.采样时间尽可能在发病的初期，急性期或患者人院的当天进行。2.标本种类的选择根据临床感染的症状及流行病学资料，判断可能感染病毒种类，选择相应部位采取标本。常见分离病毒标本的选择病毒咽拭子粪便血液脑脊液唾液组织柯萨奇A和B组+++心单纯疱疹病毒+脑膜腮腺炎病毒+++流感病毒+轮状病毒+HAV+HIV+精液3．常见标本的采集方法(1)血液：以无菌取抗凝血10ml。抗凝选用100n／ml肝素钠。用于分离CMV、HSV，、黄

3、病毒、EBV、HIV-1及新生儿肠道病毒。(2)脑脊液：以无菌取脑脊液1～2ml，冰浴立即送检。在4℃可存放72h。用于分离柯萨奇病毒、ECHO病毒、肠道病毒、腮腺炎病毒。(3)宫颈或阴道拭子：采取病灶部位分泌物，或将拭子伸人宫颈约lcm停留5秒取出，冰浴立即送检。用于分离HSV、CMV。(4)粪便标本：取2～4ｇ粪便加10ml运送液立即送检，用于分离腺病毒、肠道病毒和轮状病毒。(5)含漱液：用无菌生理盐水让患者含漱。用于分离流感病毒、副流感病毒、鼻病毒、RSV等。(6)喉拭子：用压舌板避免唾液污染，用拭子采取咽喉部表面。用于分离腺病毒、CMV、肠道病毒、HSV、流感病毒等。(7

4、)尿道拭子及尿液标本：尿道拭子伸人尿道4cm转动3次，以获得较多的上皮细胞，用于分离CMV和HSV。(8)尸检标本：死亡后尽早采集各种器官，分别使用器械和容器。二、标本的运送和保存病毒抵抗力弱，室温中容易灭活，用于分离培养的标本要尽快送检，4℃下数ｈ或-70℃。冻存液中加入甘油或二甲基亚砜(DMSO)等作保护。病毒传送培养基以Hanks液为基础加灭活的小牛血清。为抑制细菌生长加青霉素100U／ml和链霉素100μg／ml，为了抑制真菌的生长加入2．5μg／ml二性霉素B或40μg／ml制霉菌素。第二节病毒分离与鉴定一、病毒的分离方法1.组织细胞培养根据细胞的来源、特性和传代次数分

5、为：(1)原代细胞培养：将细胞悬液。加入营养液培养。形成的单层细胞，称之为原代细胞。(2)二倍体细胞株：仍保持二倍体特性。寿命一般为40～50代，如人胚肺细胞。广泛用于病毒分离和疫苗制备。(3)传代细胞系：来于肿瘤细胞，染色体特征类似肿瘤细胞。常用的有人宫颈癌细胞(Hela)、人喉上皮癌细胞(Hep-2)。2．鸡胚接种鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料。3．动物接种动物对病毒的敏感性是不同的，选择合适动物十分重要。小鼠、乳鼠、家兔、豚鼠、猴等常用于分离病毒。常用于病毒分离的细胞细胞种类可分离的病毒原代细胞非洲绿猴肾细胞人单核细胞人胚肾、肺细胞恒河猴猕猴肾细

6、胞HSV、RSV、VZV、腮腺炎病毒、风疹病毒HIV、HTLV、HHV-6腮腺炎病毒、腺病毒ECHO、脊髓灰质炎病毒、柯萨奇A、B组、RSV二倍体细胞株人胚肺成纤维细胞株WI-38、MRC—5CMV、VZV、鼻病毒腮腺炎病毒、腺病毒传代细胞系HelaHep-2Vero柯萨奇A、B组、RSV腺病毒、RSVHSV、RSV、风疹病毒、轮状病毒、麻疹病毒三、病毒的鉴定必须通过全面了解其特性才能得到鉴定。1.根据临床特点，流行病学资料，标本来源，大致了解病毒的一些特性，有助于确认病毒的种类。2.动物感染范围及特点病毒感染动物的范围、发病的潜伏期。3.细胞培养特点。综合上述资料作出鉴定。病毒

7、鉴定的方法1.细胞培养的结果观察病毒增殖后导致细胞发生:①细胞病变效应(CPE)。细胞肿大，变圆堆积成葡萄状，细胞溶解出现空斑，细胞融合形成多核巨细胞，胞浆内或核内出现嗜酸性或嗜碱性包涵体等；②不出现细胞病变现象。③细胞培养液pH的变化。2.中和试验病毒与特异性抗体进行免疫反应，使病毒失去感染性，在细胞培养和活的机体内不出现病变的试验。常用细胞培养进行中和试验。如果特异性抗体能中和病毒，使之失去感染性，不出现细胞病变效应，则该病毒为特异性抗体的同型病毒，用于病毒的分型诊断最具敏感