羊种布鲁氏菌omp10基因的克隆及原核表达

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1、·１２２·生物技术中国畜牧兽医２０１４年第４１卷第１２期羊种布鲁氏菌Ｏｍｐ１０基因的克隆及原核表达徐开莲，朱华培，赵天靖，贾晓晓，郭莳雨，庞峰，焦寒伟，成鹰，杜丽，史巧芸，荣辉，张珈宁，王凤阳（海南大学农学院，海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室，海口市动物基因工程重点实验室，海南海口５７０２２８）摘要：根据ＧｅｎＢａｎｋ公布的羊布鲁氏菌（Ｂ．ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）Ｍ５－９０株外膜蛋白（ｏｕｔｅｒｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ，Ｏｍｐ）基因序列，设计１对引物，以其全基因组为模板，采用ＰＣＲ技术对其进行扩增，得到３８１ｂｐ的目

2、的片段，连接入ｐＭＤ２０－Ｔ载体，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α感受态细胞；测序正确后，构建ｐＥＴ－２８ａ－Ｏｍｐ１０原核表达质粒，再将该质粒转化入Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３），ＩＰＴＧ诱导表达融合蛋白Ｈｉｓ－Ｏｍｐ１０，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ进行分析。结果表明，成功构建了含Ｏｍｐ１０基因的原核表达载体，并在Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中表达了Ｏｍｐ１０基因，诱导得到的融合蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致，证明Ｏｍｐ１０得到成功表达。该试验为布鲁氏菌病的进一步研究奠定基础。关键词：布鲁氏菌；Ｏｍｐ１０基因

3、；原核表达；克隆中图分类号：Ｒ３７８．５文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－７２３６（２０１４）１２－０１２２－０４布鲁氏菌（Ｂ．ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ）病是由细胞内兼性布在中国部分地区有明显上升的趋势，虽然已有用于鲁氏菌引起的，是世界范围内常见的人畜共患病，能预防该病的疫苗，但安全性和保护率均较低。布鲁引起家畜流产及人的热性疾病（Ｓｍｉｔｈ等，２０１３）。氏菌Ｏｍｐｓ免疫原性强，可诱导动物产生高滴度的世界上１７０多个国家和地区有人、畜布鲁氏菌病的特异性抗体，可用于布鲁氏菌病的诊断（Ｅｓｔｅｉｎ等，存在和流行（Ｒａｊｅｓｈ，２００

4、３）。布鲁氏菌属为微小革２００４），同时也可作为潜在的抗原靶标，在人体保护兰氏阴性，无荚膜、鞭毛、芽孢及天然质粒的三层膜性免疫反应中起重要作用（张亮等，２００９）。其免疫结构的多形性球杆菌，其外膜与肽聚糖层紧密结合原性可能与布鲁氏菌在巨噬细胞内的存活有关成细胞壁，含有脂多糖、蛋白质和磷脂（Ｓｈｏｈｒｅｈ等，（Ｃｌｏｅｃｋａｅｒｔ等，２００２）。目前国内外都缺乏高效安２００２）。外膜的蛋白质称为外膜蛋白（ｏｕｔｅｒｍｅｍ－全的布鲁氏菌疫苗，该菌的检测方法存在耗时耗力、ｂｒａｎｅｐｒｏｔｅｉｎ，Ｏｍｐｓ）。近年来，布鲁氏菌病发生率

5、不能快速处理大量样本的缺点，利用细菌多糖抗原的血清学检查也由于存在交叉感染，不能鉴别属于收稿日期：２０１４－０４－２８作者简介：徐开莲（１９８９－），女，贵州人，硕士生，研究方向：动天然感染还是疫苗接种，这些不足使其在临床应用物功能基因组学。上受到一定的限制。因此，寻找布鲁氏菌特异性的通信作者：王凤阳（１９７０－），男，教授，博士生导师。Ｅ－ｍａｉｌ：优势抗原作为诊断布鲁氏菌病的有力依据显得尤为ｆｙｗａｎｇ６８＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ基金项目：“８６３”计划（２０１１ＡＡ１００３０２、２０１３ＡＡ１０２５２４）。重要。本试验对

6、布鲁氏菌Ｍ５－９０株Ｏｍｐ１０基因进櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅ＲｅｓｅａｒｃｈＰｒｏｇｒｅｓｓｏｎＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＭｅｔａｇｅｎｏｍｉｃｓｉｎｔｈｅＡｎｉｍａｌＧａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌＴｒａｃｔＭｉｃｒｏｂｉｏｔａＦＡＮＺｈｏｎｇ－ｙｕａｎ，ＬＩＧｕａｎｇ－ｙｕ，ＬＩＵＨａｎ－ｌｕ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｐｅｃｉａｌＥｃｏｎｏｍｉｃＡｎｉｍａｌａｎｄＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃ

7、ｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３０１１２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｕｎｄｅｒｌａｂｏｒａｔｏｒｙｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｃｕｌｔｉｖａｂｌｅｍｉｃｒｏｂｅｓｗｉｔｈｌｅｓｓｔｈａｎ１％ｏｆｔｏｔａｌｍｉｃｒｏｂｅｓｉｎｎａｔｕｒｅ，ｔｈｉｓｉｓｌｉｍｉｔｅｄｔｏｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇａｎｄｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ．Ｍｅｔａｇｅｎｏｍｉｃｓｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｃｕｌｔｕｒａｂｌｅｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｂｒｉｎｇａｎｅｗｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｆｏｒｓｔｕｄｙｍｉｃｒ

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