巴山冷杉中莽草酸的提取工艺及含量测定初步研究

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1、巴山冷杉中莽草酸的提取工艺及含量测定初步研究【关键词】巴山冷杉;莽草酸;提取工艺;含量测定　　(ShoolofChineseIndigenousMedicine,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016,China)Abstract:ObjectiveToestablishmethodsforthedeterminationandextractionofshikimicacidfromAbiesfargesiiFranch.MethodsShikimicacidployedtodetermineshikimicacid

2、.ResultsThelinearityofshikimicacidL-1(r=0.9993),andtheaveragerecoveryicacidpleandconvenient.Thismethodisconvenient,rapidandaccurate,andcanbeusedforthedeterminationofshikimicacidinAbiesfargesiiFranch.　　Keyicacid;extractionprocess;determination　　目前莽草酸主要于木兰科八角茴香(Fructusanisistellati)，为抗

3、禽流感与甲流感药物磷酸奥司他韦(OseltamivirPhosphate)的重要前体[1]，故研究莽草酸的新资源具有重要的意义。据报道松科杉属植物(圣诞树类)中含有莽草酸(Shikimicacid)，并具有工业生产价值[2]。同属植物巴山冷杉(AbiesfargesiiFranch)是我国独有物种，分布在海拔1500～3000m的以秦巴山地为中心的大巴山、秦岭与神农架等地山区[3]。巴山冷杉中是否含有莽草酸及其提取分离、含量测定方法等研究尚未见报道。　　1材料与仪器　　LC/MS2010A液质联用仪(岛津，电喷雾离子化接口单级四极杆质谱检测器，ESI离子源);

4、AgiLent1100高效液相色谱仪(美国)，VDettlerToledoAG135);UV2501PC(岛津);PE红外分光光度仪(美国);LXJ11B离心机(上海精密仪器仪表有限公司)。　　巴山冷杉，采自巫山县小山峡，经重庆医科大学生药室王刚副教授鉴定为松科植物巴山冷杉(AbiesfargesiiFranch)。取其嫩茎及叶于90℃干燥，粗碎，备用;莽草酸对照品(批号：20060102，西安飞达生物技术有限公司，质量分数98%);水为重蒸水或去离子水;甲醇为色谱纯，其余试剂分析纯。　　2方法与结果　　2.1巴山冷杉叶中莽草酸的鉴定　　参考文献[4]从松

5、科马尾松中获得莽草酸的方法，取冷杉叶粗粉2kg，8倍量水煎煮2次，滤过，合并滤液，减压浓缩至样品∶溶液≈1∶1，静置24h，离心(5000r·min-1)，取上清液，用乙酸乙酯1500mL分次萃取，水相用水饱和的正丁醇1500mL分次萃取，合并正丁醇部分，减压浓缩使成稠膏，加适量甲醇微热使溶，进行柱层析(硅胶)，薄层色谱追踪检测，以石油醚乙酸乙酯(体积比4∶1)洗脱，再用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，回收甲醇，用甲醇丙酮(体积比4∶1)反复重结晶，得白色晶体0.8g，作为样品。mp187～188℃。IR(KBr)cm-1：3482，　　2953～2523，168

6、2，1648，1455，1292，1277，　　1092，1072，931，863，739，样品的波谱、质谱数据均与莽草酸对照品相一致，见图1～3。广东药学院学报第26卷第4期林於，等.巴山冷杉中莽草酸的提取工艺及含量测定初步研究　　2.2巴山冷杉叶中莽草酸的提取、分离工艺研究　　2.2.1提取次数的考察取巴山冷杉叶粗粉(莽草酸含量为0.91%)500g，加适量水煎煮3次，每次60min，分取各次提取液，分别离心(5000r·min-1)，滤过。分取各次提取液适量，依“2.3.1”项下方法测定并计算莽草酸含量，参照药典附录ⅨH烘干法测定干浸膏量，结果见表1。表1

7、表明，第2次提取莽草酸的转移率为14.1%，仅为第1次提取莽草酸的转移率的17%;而第2次提取的杂质量却为第1次提取的41%。因巴山冷杉叶成本低，而提取、浓缩过程中所耗能源、时间较多，故选择的提取工艺为：10倍量水煎煮提取1次，提取时间60min。　　2.2.2分离纯化工艺经反复考察，最后确定的分离纯化工艺如图4。按此工艺纯化所得莽草酸结晶的纯度为96.2%，收率为0.51%(结晶量/投料量)。　　提取液浓缩静置24h上清液乙醚乙酸乙酯(体积比1∶1)萃取脱脂水溶液浓缩　　稠膏加乙醇至含醇60%静置24h上清液回收乙醇减压抽干干浸膏甲醇溶解活性炭回流脱色，滤过

8、　　滤液回收甲醇减压抽干