老年胆固醇结石患者载脂蛋白e基因多态性分析

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1、老年胆固醇结石患者载脂蛋白E基因多态性分析作者：向红胡靖陈淑华周军田韵周丽闾宏伟【摘要】目的探讨载脂蛋白E(ApoE)基因多态性在老年胆固醇结石发病中的意义。方法采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法(PCRRFLP)，检测92例老年胆囊胆固醇结石患者和98例健康老年人的ApoE基因多态性及等位基因频率，对两组基因表型及等位基因频率进行统计学分析。结果老年胆囊胆固醇结石患者组ApoE基因型ε3/4的频率26.1%(24/92)明显高于健康老年人对照组6.1%(6/98)(P<0.05)，老年胆囊胆固醇

2、结石患者组ε4等位基因频率为32.7%，明显高于健康老年人对照组的21.4%(P<0.05)。结论ApoE基因多态性与老年人胆囊胆固醇结石的发病相关;等位基因ε4是老年胆囊胆固醇结石形成的危险因素。【关键词】载脂蛋白E;胆固醇结石;等位基因　　【Abstract】ObjectiveTostudytherelationshipbetorphismsofapolipoprotEinE(ApoE)andcholesterolcalculusintheelderly.MethodsThepolymerasechainr

3、eactionrestrictionfragmentlengthpolymorphism(PCRRFLP)techniqueorphismsofApoEgeneandallelefrequenciesin92elderlypatientsorphismfrequenciesincholesterolcalculusgrouporphismsarerelativetocholesterolcalculusandalleleε4isariskfactorinelderlycholesterolcalculuspati

4、ents.　　【Keyega公司。　　1.3方法　　1.3.1基因组DNA提取采取外周静脉全血2ml，EDTA抗凝，取300μl抗凝全血，用DNA提取试剂盒(GenomicDNAPurificationKit)提取基因组DNA。　　1.3.2PCR扩增PCR反应体积为100μl，基因组DNA2μl(100ng),10mmol/LdNTP4μl，0.05nmol/Lp1引物2μl，0.05nmol/Lp2引物2μl，10×buffer10μl，5UTaq酶，100%二甲基亚砜(DMSO)10μl。PCR反应条件：95℃

5、预变性5min，变性95℃30s，退火65℃30s，延伸72℃30s，共33次循环，延伸72℃5min。ApoE基因扩增全长预计292bp。　　1.3.3RFLP分析酶切体系为30μl：PCR产物10μl，10×HhaⅠbuffer3μl，20UHhaⅠ内切酶，补充双蒸水至30μl，于37℃水浴中酶切4h。取酶切产物30μl，经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，电压80V，电泳8h，溴化乙锭染色，于SYNGENE凝胶成像系统下观察结果。　　1.4统计学处理采用SPSS11.0统计软件包，ApoE基因型频率和等位基因频率分

6、布以百分率(%)表示,分类资料采用χ2检验。　　2结果　　老年胆囊胆固醇结石患者组和对照组DNA标本经PCRRFLP后12%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测可出现6种不同的带型，纯合子ε2/2在91bp、83bp、61bp出现电泳条带;纯合子ε3/3在91bp、61bp、48bp、35bp出现电泳条带;纯合子ε4/4在72bp、61bp、48bp、35bp出现电泳条带;杂合子ε2/3在91bp、83bp、61bp、48bp、35bp出现电泳条带;杂合子ε2/4可在91bp、83bp、72bp、61bp、48bp、35bp出现

7、电泳条带;杂合子ε3/4在91bp、72bp、61bp、48bp、35bp出现电泳条带;见表1,图1。根据此判断标准，分析胆囊胆固醇结石患者92例和正常人98例的ApoE基因型，并计算其三个等位基因频率(见表2)。结果表明，胆囊胆固醇结石组的ε3/4基因型频率(26.1%)和ε4等位基因频率(32.7%)均高于对照组。表1不同ApoE基因型经HhaⅠ酶切后的DNA片段大小表2各组ApoE基因型及等位基因频率分布　　3讨论　　ApoE主要在肝细胞内合成，但许多肝外细胞包括巨噬细胞和中枢神经蚀质细胞也能产生，是一种影响脂

8、蛋白代谢的遗传多态性蛋白〔1～3〕。含有ε2、ε3和ε4三种等位基因。决定这种差异的是112位和158位的氨基酸，ε2的两个位置都是胱氨酸(Cys);ε4的两个位置都是精氨酸(Arg);ε3的112位是Cys，158位是Arg。它们分别由位于人第19号染色体q13.2区的3个等位基因ε2、ε3和ε4编码。3种等位基因两两组合产生6种基因表型，在