vegf 936c-t基因多态性与进展性卒中相关性的研究

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1、VEGF936C/T基因多态性与进展性卒中相关性的研究【关键词】进展性卒中VEGF936C/T单核苷酸多态性Correlativestudyon936C/Tgenepolymorphismofvascularendothelialgroorphismofvascularendothelialgroethodofrestrictivefragmentlengthpolymorphism（RFLP）,theVEGFgenotypesof66strokeinprogressionpatients,134pletedstrokepatientsand100healthycontro

2、lsubjectsorphismandstrokeinprogressionilarorphisms进展性卒中（strokeinprogression,SIP）是指卒中发病后神经功能缺失症状在48h内逐渐进展或呈阶梯式加重。其发病率为卒中患者的30%，致残率和致死率较一般卒中高，是影响病人预后的重要原因之一，也是脑血管病治疗中的难点。目前，已经发现的危险因素有高血压病、糖尿病、感染、人疱疹病毒感染和脑血管狭窄等。尽管我们对以上危险因素进行了积极的防治，仍有一部分患者会进展。说明进展性卒中的病因仍没有完全阐明。遗传、多基因、多态性这三个方面是进展性卒中研究的热点。应用单核苷酸

3、多态性进行遗传性相关性研究，可以为脑卒中进展的危险性提供预示作用。血管内皮生长因子（vascularendothelialgroarker购自Takara公司；NIaⅢ限制性内切酶购自NEB；VEGF引物合成由美国ABI公司完成。1.3方法用RFLP法鉴定VEGF的基因型。抽取每位受检者空腹静脉血3ml,按照常规方法从白细胞中提取基因组DNA，4℃保存。PCR引物参照文献［2］设计并合成，正向引物：5’-AAGGAAGAGGAGACTCTGCGC-3’，反向引物：5’-TATGTGGGTGGGTGTGTCTACAG-3’。PCR反应体系50μl,包括正向反向引物各1μl、d

4、NTP4μl、模板DNA8μl、Taq酶1μl、ddH2O30μl、loddingbuffer5μl。PCR反应条件：95℃预变性4min、95℃变性30s、60℃退火45s、72℃延伸45s、30个循环后、72℃再延伸5min。产物用2%琼脂糖凝胶电泳鉴定，为198bp。PCR产物用限制性内切酶NIaⅢ（NewEnglandBiolabs）5u于37℃消化3h后，再经4%琼脂糖凝胶电泳鉴定VEGF基因型。1.4统计学方法所有数据应用windowsSPSS13.0统计软件进行分析。Hardy-Weinberg平衡和计数资料用χ2检验；通过Logistic回归筛选进展性卒中的

5、危险因素，优势比（oddsratio,OR）用来衡量卒中进展的风险性。P＜0.05表示差异有统计学意义。2结果用RFLP法鉴定VEGF的基因型，其电泳结果见图1。VEGF936C不被分解（198bp）,而VEGF936T被分解为两段（分别为114bp和84bp）。糖尿病、高血压病、感染、脑血管狭窄和VEGF936T携带者均是进展性卒中的危险因素。病例组和对照组的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡，进展性卒中组与普通脑梗死组基因型分布情况比较见表1；进展性卒中组与健康对照组基因型分布情况比较见表2；普通脑梗死组与健康对照组基因型分布情况比较见表3。说明进展性卒

6、中组和普通脑梗死组的VEGF936C/T基因型分布不同，不能认为普通脑梗死组和健康对照组的VEGF936C/T基因型分布相同。进展性卒中组VEGF936T等位基因携带者的频率为50%，显著高于普通脑梗死组的31.3%，进展性卒中的936T等位基因携带者的比值比OR值为1.882，95%的可信区间为1.269～2.789,见表4。说明VEGF936T等位基因携带者与VEGF936CC纯合子的患者相比卒中进展的风险性会增高1.882倍。表1进展性卒中组和普通脑梗死组VEGF936基因型分布的比较表2进展性卒中组和健康对照组VEGF936基因型分布的比较表3普通脑梗死组和健康对照

7、组VEGF936基因型分布的比较表4进展性卒中VEGF936T有关参数的估计值VEGF可以增加血管通透性，诱导血管新生，同时，VEGF作为局部内生性调节剂，能够保持内皮细胞的完整性，维持内皮细胞的正常功能，从而避免触发内源性或外源性凝血途径［4］。研究发现VEGF还能够增加丝氨酸蛋白酶、纤维蛋白溶解酶、尿激酶和组织型纤溶酶原的表达和活性，从而发挥抗血栓形成作用［5］。目前国外有文献报道，VEGF对缺血脑细胞DNA损害与修复具有重要影响［6］，另有文献报道，VEGF可诱导抗凋亡蛋白的表达，是内皮细胞的一个生存因素。如