染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用

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1、染料木黄酮对帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用：杨延东高全桂陈文芳【摘要】　　目的探讨染料木黄酮对1甲基4苯基1,2,3,6四氢吡啶（MPTP）制备的帕金森病（PD）模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法将C57BL6雄性小鼠随机分为正常对照组、MPTP模型组及染料木黄酮预处理组。用逆转录聚合酶链式反应（RTPCR）技术检测黑质酪氨酸羟化酶（TH）及多巴胺转运体(DAT)基因的表达水平。应用高效液相色谱法检测纹状体（Str）内DA及其代谢物二羟基苯乙酸（DOPAC）含量。结果MPTP模型组黑质TH和DAT基因的表达较正常对照组明显降低，染料木黄酮预处理组可

2、逆转上述改变（F=20.31、13.19,P<0.01)。MPTP模型组Str内DA及其代谢产物DOPAC的含量较对照组明显减少，应用染料木黄酮后可逆转上述改变(F=63.58、16.12,P<0.01)。结论染料木黄酮对MPTP制备的PD模型小鼠黑质纹状体DA能神经元有明显的保护作用。【关键词】帕金森病染料木黄酮1甲基4苯基1236四氢吡啶黑质纹状体　　［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectofgenisteinondoparminergicneurons.MethodsC57BL6micelydi

3、videdintothreegroups:controlgroup(DMSO,ip),MPTPgroup(15mg/kg,ip)andgenisteinpretreatment(10mg/kg,ip)group.Thechangesoftyrosinehydroxylase(TH)anddopaminetransport(DAT)geneexpressioninsubstantianigra(SN)erasechainreaction(RTPCR).ThecontentsofDAanditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOP

4、AC)inedbyhighperformanceliquidchromatographyelectricalchemicaldetection(HPLCECD).ResultsGenisteinpretreatmentcouldpreventtheMPTPinduceddecreaseofTHandDATgeneexpression(F=20.31,13.19;P<0.01).MPTPsignificantlydecreasedthelevelsofdopamine(DA)anditsmetabolitesdihydroxyphenylaceticacid(DOP

5、AC)inthestriatum,ent(F=63.58,16.12;P<0.01).ConclusionGenisteinhasneuroprotectiveeffectsondopaminergicneuronsagainstMPTPinducedmousemodelofPD.　　［KEYPTP）建立PD模型小鼠，研究染料木黄酮对黑质酪氨酸羟化酶（TH）和多巴胺转运体(DAT)基因表达以及纹状体DA及其代谢产物含量的影响，以期为PD的防治提供进一步的实验依据。现将结果报告如下。　　1材料与方法　　1.1实验动物和药品　　选用健康雄性C57BL6小鼠18只，体质量为

6、(20±2)g,由北京维通利华动物实验中心提供，合格证号：SCXK（京）20020003。置于（19.0±2.0）℃室温下，以12h12h昼夜循环光照，自由进食、饮水。动物于实验前适应实验室环境1周。染料木黄酮为上海同田生化技术有限公司产品；MPTP、DA和DOPAC均为Sigma公司产品；逆转录试剂盒为PROMEGA公司产品；TagDNA聚合酶为TAKARA公司产品。　　1.2实验动物造模与给药　　实验动物随机分为正常对照组、MPTP模型组和染料木黄酮预处理组，每组6只。3组动物每天8：00时先行腹腔注射二甲基亚砜（DMSO)或染料木黄酮(10mg/kg)，连续3d；M

7、PTP模型组于第4天注射DMSO后2h开始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，连续注射4次，每次间隔2h，自第5天开始继续腹腔注射DMSO，连续4d；染料木黄酮预处理组于第4天注射染料木黄酮后2h开始腹腔注射MPTP(15mg/kg)，连续注射4次，每次间隔2h，自第5天开始继续腹腔注射染料木黄酮，连续4d。　　1.3RTPCR检测　　末次注射24h后断头取脑，快速取双侧SN，加TRIzol试剂提取总RNA。总RNA经紫外线分光光度计定量后,参照试剂盒说明书建立20μLRT反应体系：取3μg总RNA加