三七皂苷r1在大鼠体内的代谢产物分析

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1、三七皂苷R1在大鼠体内的代谢产物分析【摘要】　　目的研究三七皂苷R1在大鼠体内的代谢情况，阐述三七皂苷R1在大鼠体内的代谢产物。方法以三七皂苷R1的微生物转化产物为对照品；采用LC-ESI-MS/MS方法，检测大鼠体内的代谢产物。结果在大鼠体内共检测到8个代谢产物，并利用对照品鉴定了它们的结构分别为：20(S)-三七皂苷R2，20(R)-三七皂苷R2，20(S)-人参皂苷Rh1，20(R)-人参皂苷Rh1，人参皂苷Rh4，原人参三醇，人参皂苷F1和3β,12β-二醇达玛烷-E-20(22),24-二烯-6-O-β-D-木糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷。结论三七皂苷R1

2、在大鼠体内的代谢产物较多，且与微生物转化产物具有很强的相似性。【关键词】三七皂苷R1　代谢产物　高效液相色谱-质谱联用　　Abstract:ObjectiveToinvestigatethemetabolitesofnotoginsenosideR1inrats.MethodsThemicrobialtransformationmetabolitesofnotoginsenosideR1etabolismstudiesofnotoginsenosideR1inrats.ResultsThestructuresofeightmetabolitesofnotoginseno

3、sideR1inratfecesbiotransformation.Theirstructuresmar-E-20(22)-24-diene-6-O-β-D-xylopyranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside.ConclusionNotoginsenosideR1isextensivelymetabolizedinratandhasthesamemetabolicpathicroorganismstosomeextent.　　KeyLC-MS(SanJose，CA，USA)，使用FinniganXcalibur数据处理系统。Thermo液相色

4、谱仪，AgilentZorbaxSB-C18反相色谱柱(5μm，250mm×4.6mm)，AgilentZorbaxSB-C18保护柱(5μm，20mm×4mm)。　　1.2药品与试剂色谱纯乙腈(Merck,Darmstadt,Germany)，去离子水经过Milli-Q系统纯化(Millipore,Bedford,MA,USA)，三七皂苷R1(昆明众正生物科技有限公司，纯度大于98%)，其余人参皂苷对照品由采用微生物转化方法获得，其纯度均大于95%［7］。其余试剂均为分析纯(国药集团化学试剂公司)。　　1.3样品的采集及处理Sprague-Dag·kg-1剂量灌胃给予

5、三七皂苷R1，置于代谢笼中，继续禁食，于给药后24，48，60和72h收集粪便，冷冻保存，待处理。将1g粪便称重后研磨，加入2ml甲醇超声提取30min后于3000r/min离心10min，上清液经0.45μm滤膜过滤，续滤液备用。　　1.4HPLC-DAD分析条件流动相为乙腈-水，梯度洗脱程序为0～30min，由15％的乙腈线性升至22％；50min，升至30％；80min，升至40％；120min，升至60％。流速为1.0ml·min-1，柱温为30℃，检测波长为203nm。进样量20μl。　　1.5LC-MS分析条件流动相为乙腈-0.2%醋酸水，梯度洗脱程序为0～

6、10min，由20％的乙腈线性升至22％；20min，升至30％；50min，升至40％；70min，升至60％。电喷雾离子化(ESI)源，正离子模式；质谱条件经过反复优化，最终确定为：鞘气流速为40arb；助气流速为10arb；喷雾电压为4.5kv；毛细管温度为300℃。　　2结果　　2.1代谢产物HPLC分析取粪便样品溶液，在“1.4”项色谱条件下进行HPLC-DAD检测分析。共检测到底物三七皂苷R1和7个代谢产物M1～M7的色谱峰。见图2。经与对照品进行比对确定代谢产物的结构分别为：20(S)-三七皂苷R2(M1)、20(R)-三七皂苷R2(M2)、20(S)-人

7、参皂苷Rh1(M3)、20(R)-人参皂苷Rh1(M4)、人参皂苷Rh4(M5)、原人参三醇(M6)和人参皂苷F1(M7)。同时记录所测的底物和4个主要的代谢产物的色谱峰面积，与时间作图，记录粪便中的含量变化。见图3。　　2.2代谢产物LC-MS/MS分析样品经LC/MS/MS分析，进行全离子和选择离子扫描，检测到了底物及8个代谢产物M1～M8。其LC/MS选择离子流图见图4。分别对8个代谢产物进行MS和MS/MS分析，将所得的碎片离子与对照品的相比较。在MS谱中，M1和M2均显示m/z771［M+H］+的准分子离子峰，比三七皂苷R1的m