扇贝糖胺聚糖对ⅰ型单纯疱疹病毒的抑制作用

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1、扇贝糖胺聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒的抑制作用：于囡刘赛韩建建孙福生【摘要】　　目的研究扇贝裙边糖胺聚糖(SSGAG)不同浓度及不同作用时间对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSVⅠ)的抑制作用。方法以HSVⅠSM44株感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),观察病毒感染后的细胞变性反应（CPE）,并检测不同浓度SSGAG及不同作用时间对HSVⅠ复制的抑制作用。结果与病毒对照组相比，SSGAG各浓度组（100、50、25mg/L）能有效保护经HSVⅠ感染的Vero细胞，使细胞活性增强（F=27.54,P<0.01）；并减弱HSVⅠ导致的病变效应，抑制病毒的复制，并且随着药物

2、作用时间的延长，药物抗病毒效应逐渐增加，最高达88.64%。结论SSGAG体外具有明显的抗HSV1病毒作用。【关键词】糖胺聚糖扇贝裙边疱疹病毒Ⅰ型人　　［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectofglycosaminoglycanfromscallopskirt(SSGAG),indifferenttimeandconcentration,ontypeⅠherpessimplexvirus(HSVⅠ).MethodsTheVerocellse,onreplicationofHSVⅠinoglycan;Scall

3、opskirt;Herpesvirus1,human　　单纯疱疹病毒(HSV)属疱疹病毒科,为DNA病毒,其病毒基因组由一线形的双股DNA分子构成。Ⅰ型人类单纯疱疹病毒可引起唇疱疹、疱疹性角膜结膜炎、新生儿脑炎等多种疾病，目前尚无有效疫苗用于预防。临床应用的抗病毒药物毒性大，加之毒株的变异容易产生耐药性，因此，筛选研制新的抗病毒药物就尤为重要。近年来，随着海洋生物资源的开发，人们发现了许多具有独特生物活性的海洋生物多糖。扇贝裙边糖胺聚糖(SSGAG)是从海洋贝类扇贝裙边中提取、纯化得到的酸性黏多糖(即硫酸多糖)。据文献报道，动物体内的硫酸多糖具有多种药理活性，如抗凝血、

4、降血脂、抗病毒及增强免疫功能等，已引起人们对这类生物高分子的高度重视[1，2]。本实验以非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)为宿主细胞，通过细胞培养法对扇贝裙边糖胺聚糖（SSGAG）在不同剂量及不同给药时间其体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒（HSVⅠ）的作用进行了初步研究。现报告如下。　　1材料与方法　　1.1实验材料　　SSGAG为青岛大学医学院药理教研室扇贝糖胺聚糖课题组提供的粉剂，实验时用无血清DMEM培养基配成不同浓度的溶液；DMEM干粉培养基为Hyclone公司产品;胎牛血清（FetalBovineSerum，FBS）为杭州四季青生物工程材料有限公司产品；胰蛋白酶为AMR

5、ESCO公司产品；乙二胺四乙酸二钠（EDTA）由青岛海泰生物技术有限公司分装；酸性异丙醇为上海亨达化学试剂有限公司产品；四甲基偶氮唑蓝（MTT）为Sigma公司产品。TC2323型CO2培养箱为美国FormaScientific公司产品;XDP1型倒置显微镜为日本Olympus公司产品;ELx800型酶联免疫检测仪为美国BioTek公司产品;细胞培养板为Costar公司产品;超净工作台为苏净集团安泰公司产品。标准单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSVⅠ)SM44株由中国协和医科大学提供。HSVⅠ在Vero细胞中传代，毒种于-80℃保存。SSGAG(青岛大学医学院药理学教研室提供

6、)使用前用无血清DMEM培养液稀释到所需浓度。实验分为正常细胞对照组、病毒对照组、SSGAG各浓度组（100、50、25mg/L）。　　1.2实验方法　　1.2.1细胞培养Vero细胞由农业部动物检疫所惠赠。于DMEM高糖基础培养液中加入体积分数0.10的小牛血清、100U/mL青霉素及100mg/L链霉素，置体积分数为0.05的CO2孵箱中37℃常规培养。　　1.2观察指标测定　　1.2.1病毒毒力测定[3]用病毒的致50%组织培养感染量（TCID50）表示病毒毒力。将Vero细胞接种于无菌96孔板,长成单层后，将HSVⅠ病毒原液进行连续10倍递次稀释,稀释度为10

7、-1～10-9，每孔接种上述系列稀释度的病毒稀释液100μL,于37℃吸附1.5h后换维持液继续培养,每个稀释度设6个复孔,并设6孔正常细胞对照。每日在倒置显微镜下观察细胞病变（CPE）。CPE达50%以上计为病变孔，记录病变程度和孔数,待细胞病变稳定后，判定结果。记录标准：CPE0%为“-”；CPE1%～25%为“+”；CPE26%～50%为“”；CPE51%～75%为“”；CPE76%～100%为“”。根据ReedMuench法计算病毒的TCID50。　　1.2.2SSGAG对HSVⅠ复制的抑制作用将100TC