肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统的构建的论文

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1、肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统的构建的论文【摘要】目的利用婴儿双歧杆菌对实体瘤低氧区的靶向效应，构建肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统ptrkh2pst/cd和ptrkh2pst/uprt。方法用pcr的方法从质粒pgex/cd和pgex/uprt中扩增出cd基因和uprt基因，双酶切cd基因、uprt基因和质粒ptrkh2pst，分别连接后重组于大肠杆菌中。之后用电转化的方法将重组质粒转入婴儿双歧杆菌中。用rtpcr检测该系统mrna水平的表达，sdspage检测该系统在蛋白质水平的表达。在黑色素瘤b16f10细胞上检测该系统的体外肿瘤细胞杀伤效果。结果成功地将cd基因和u

2、prt基因转入了质粒ptrkh2pst，cd基因和uprt基因的测序结果表明序列与genebank公布的序列一致。rtpcr检测到cd和uprtmrna水平的明显表达。在含有cd基因的婴儿双歧杆菌细胞全蛋白中发现了cd蛋白质的表达，在含有uprt基因的婴儿双歧杆菌上清液中发现了uprt蛋白质的表达。黑色素瘤细胞的低存活率证明了ptrkh2pst/cd、ptrkh2pst/uprt自杀基因治疗系统对黑色素瘤的显著杀伤作用。结论肿瘤厌氧靶向双自杀基因治疗系统ptrkh2pst/cd、ptrkh2pst/uprt构建成功并显示出杀伤肿瘤细胞的作用。【关键词】婴儿双歧杆菌；自杀基

3、因；cd基因；uprt基因；肿瘤靶向性constructionofanaerobicinfantbifidobacterialmediatedptrkh2pst/cdandptrkh2pst/uprtdualsuicidesystemfortumortargettinggenetherapyyepeng1,lizhuhua2,yangyanbiao3,entofpathophysiology,edicalsciencesandforensicmedicine,sichuanuniversity,chengdu610041,china；2.departmentofpathop

4、hysiology,luzhoumedicalcollege；3.thefirstpeople'shospitaloflanzhoucorrespondingauthor：ail:intotumorhypoxiatargetingcarrierofinfantbifidobacterium.methodscdgeneanduprtgeneplifiedfrompgex/cdandpgex/uprtbypcr.thecdgene,uprtgeneidptrkh2pst,thenconstructedtidsofptrkh2pst/cdandptrkh2pst/uprtusin

5、gelectroporation.theexpressionofcdanduprtinbifidobacteriumonmelanomab16f10cellseasuredusingmethylthiazolyltetrazolium(mtt)assay.resultsthecdgeneanduprtgeneidptrkh2pst.thesequencingresultsofcdgeneanduprtgeneindualsuicidesystemareconsistentrnaandproteinlevelofcdanduprt.thesurvivalrateofmelanoma

6、b16f10cellstreated1.7%~13.3%,81.3%~91.7%,26.7%~58.3%and78.3%~86.7%,respectively.conclusioncdgeneanduprtgene.thisdualsuicidegenetherapysystemshoorcells.keyinfantis；suicidegene；cdgene；uprtgene；tumortargeting1材料与方法1.1材料质粒ptrkh2pst由复旦大学生命科学院黄教授赠予，婴儿双歧杆菌2001株由四川大学华西口腔医学院赠予，质粒纯化试剂盒和pcr产物纯化试剂盒购自ome

7、gaco.，pcr反应试剂盒和dnamarker购自promegaco.(usa)，bamhi,sali购自takaraco.，其他试剂均为国产分析纯。.1.2方法以纯化质粒pgex/cd和pgex/uprt作为pcr反应的模板。根据cd基因在genebank(nc0009131)中的序列设计引物，上游引物为：5′ccgggatccctaacaatgtcgaataac3′，下游引物为：5′gtggtcgacgaattctgtaacccagtc3′