正交实验优选冠通贴剂乙醇回流工艺的论文

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1、正交实验优选冠通贴剂乙醇回流工艺的论文作者：吴金伟，何宇新，马育彪，米之金【摘要】目的优选出冠通贴剂的乙醇回流条件。方法采用正交实验法，以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标，对淫羊藿等3味药材乙醇回流的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。结果最终确定最佳工艺为加70%乙醇10倍，提取两次，1.5h/次。结论用此工艺进行验证试验，表明此工艺合理稳定,可以为工业生产提供理论基础。【关键词】淫羊藿苷；浸膏得率；正交实验；高效液相色谱冠通贴剂由淫羊藿、丹参、贯叶连翘3味中药制成的透皮贴剂，具有增加冠脉流量，扩张外周血

2、管的功效。方中君药为淫羊藿，淫羊藿主要含淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷（ica）、生物碱、维生素e等成分，其中淫羊藿苷能明显抑制心肌收缩力,降低心肌耗氧量，降低外周阻力，降低心脏负荷，这对于冠心病患者来说是十分有利的［1］。所以本文用正交实验法，以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标，对乙醇回流提取的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。　　1材料与仪器　　1.1材料　　淫羊藿、丹参、贯叶连翘购自四川省成都市西南药都，经鉴定，药材符合《中国药典》2005版要求。.淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（110737-2

3、00414）。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。　　1.2仪器　　岛津lc-20型高效液相色谱仪，主要组成部分为lc-20ab型泵、sil-20ac自动进样器、spd-m20a紫外检测器。色谱柱：ultimatetmxb-c18（5μm,4.6mm×250mm），成都思为科学仪器有限公司产品。　　2方法　　2.1测定条件［2］　　流动相为乙腈-水（30∶70）；检测波长270nm；流速1ml/min;进样量10μl；柱温35℃。　　2.2正交实验以淫羊藿苷含量和浸膏得率为指标，考察乙醇回流影响因素：乙醇浓度

4、、提取时间、乙醇用量、提取次数。采用l9（34）正交表进行实验。因素水平见表1。表1因素水平（略）　　2.3淫羊藿苷含量测定　　2.3.1标准品的配制　　精密称取60℃干燥至恒重的淫羊藿苷标准品5.2mg，置50ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，得浓度为0.104mg/ml的标准品溶液。　　2.3.2供试品溶液的制备　　称取淫羊藿、丹参、贯叶连翘各适量，按照表1～2进行正交实验。过滤，分别定容，用微孔滤膜（0.45μm）过滤，即得供试品溶液。表2正交实验（略）　　按下列公式计算总评分：浸膏得率加权评分（y1）=（浸膏得率/

5、最大浸膏得率）×20　　淫羊藿苷含量加权评分（y2）=（淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量）×80　　总评分=y1+y2　　结果见表2正交实验直观分析表，方差分析结果见表3。表3方差分析结果（略）　　2.3.3阴性样品的制备　　取丹参药材、贯叶连翘适量，同5号试验制备。　　2.3.4测定波长的确定　　取标准品溶液，进样10μl，在180～820nm波长范围内扫描，可见标准液在270nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为270nm。　　2.3.5线性关系考察　　分别用标准溶液进样2，4，8，16，20μl进行测定，以峰面积为纵

6、坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。淫羊藿苷在0.208～2.08μg之间线性关系很好。回归方程为：y=237522x-262.77，r=0.9999。　　2.3.6精密度考察　　同一标准品连续进样6次，hplc法测定。结果rsd为1.41%。　　2.3.7淫羊藿苷含量测定　　分别精密吸取标准品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液10μl，分别注入液相色谱，按“2.1”项下条件测定。结果见表2。高效液相色谱图见图1。　　2.3.8稳定性实验　　同一样品溶液各1h测1次，共测12h。结果表明样品液中淫羊藿苷在12h内稳定，其峰面

7、积rsd为2.66%。2.4浸膏得率的测定分别吸取定容后的样品液20ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速称量，计算浸膏得率。结果见表2。　　2.5验证实验　　为验证最佳工艺的准确性，保证醇提工艺的合理和稳定，按最终确定的最佳工艺，进行验证试验（n=3）。　　3讨论　　根据表3可知各因素对浸膏得率没有显著性影响（p<0.05），提取次数对浸膏得率影响最大，乙醇浓度对淫羊藿苷含量有显著性影响（p<0.05），所以在确定最佳工艺时应主要考虑乙醇浓度和提取次数

8、。各因素对提取过程的影响依次是：a>b>d>c,方差分析（见表3）结果表明，乙醇浓度对淫羊藿、丹参、贯叶连翘乙醇回流有显著性影响，从表2可以看出最佳工艺为a3b3c2d3,但是考虑实际应用中节约时间和适当降低浸膏得率，且提取次数对淫羊藿苷含量影响小，最终决定以加70%乙醇10倍，提取两次，1.5h/次，进行提取。