牛mx基因多态性分析及其与荷斯坦奶牛scs的相关性研究

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1、牛Mx基因多态性分析及其与荷斯坦奶牛SCS的相关性研究第一章文献综述1.1Mx基因Mx蛋白的结构包括三个保守结构域：N端具有三联体结构的GTPase结构域，中央相互作用结构域和C端含有亮氨酸拉链结构的GTPase效应结构域（GTPaseeffectordoma，CED）。通过序列比对发现，在具有不同抗病活性的Mx蛋白序列中，N端的GTP结合结构域高度保守，而C端GTP效应域中的亮氨酸拉链结构有所差异，在不同的Mx蛋白中，其相似性仅为22%，所以推测GTP效应结构域在Mx蛋白发挥抗病活性过程中起关键作用(Melenetal.1992)。Mx蛋白在近交小鼠中被发现以后，又在很多脊椎动物体

2、内被发现，一般以1~3种不同的异构体形式存在(HorisbergerandGunst1991)。Mx蛋白可在多种动物的多种类型细胞中表达，对多种病毒具有抗性（毕峻龙等2011）。目前已有的研究资料显示，Mx蛋白具有广谱的抗病毒活性，主要抗RNA病毒的感染如流感病毒、水疱性口炎病毒（VSV）、狂犬病毒、托高土病毒和汉坦病毒等；也有研究显示Mx蛋白对DNA病毒也有一定的抑制作用，如乙型肝炎病毒（辛婷婷等2012）。不同的Mx蛋白具有不同的抗病活性，其抗病活性取决于Mx蛋白的细胞定位(LeeandVidal2002)。小鼠的Mx1和Mx2蛋白分别定位于细胞质和细胞核(Dreidingeta

3、l.1985;Jinetal.1999)，Mx1蛋白能够抑制许多正粘膜病毒的感染，如流感病毒、托高土病毒，但对水疱性口炎病毒（VSV）无效果(Staehelietal.1986b)；Mx2蛋白对流感病毒无抑制作用，但能够特异性的抑制传染性水泡性口炎病毒（VSV）和汉坦病毒的感染(Zürcheretal.1992a)。目前在人体内发现的Mx蛋白包括等电点不同的MxA（PI＜7）和MxB（PI＞7）两种，与小鼠的Mx1和Mx2同源(Aebietal.1989)。研究显示，MxA蛋白定位于细胞质中，具有抗包括克里米亚-刚果出血热病毒、托高土病毒、杜贝病毒和汉坦病毒等在内的多种RN

4、A病毒和DNA病毒(Oelschlegeletal.2007)。..1.2体细胞与乳房炎奶牛乳房炎被定义为乳腺炎症，是世界范围内奶牛产业的一个难题。目前，乳房炎仍然是造成奶牛业经济损失最严重的疾病之一，占所有生产疾病造成的直接损失的38%(KossaibatiandEsslemont1997)。乳房炎可分为临床型乳房炎和隐性乳房炎。临床型乳房炎症状明显，主要表现在牛乳房肿胀、牛奶中体细胞数剧烈上升、日产奶量明显下降甚至不产奶。生产中临床型乳房炎发病率较低，症状明显，肉眼可观察，造成的经济损失较小。隐性乳房炎没有明显的临床症状，发病率高，同时又可转化成慢性乳房炎和临床性乳房炎，是生产中

5、造成严重经济损失的主要疾病。乳房炎所造成的损失主要包括疾病治疗费用、患病个体过早淘汰和扑杀、产奶量下降、奶售价损失及弃奶等。除经济损失外，临床型和隐性乳房炎都会对奶牛的后续生育能力产生严重的影响(Schricketal.2001)。细菌是引起乳房炎的主要病原体，引起乳房炎的病原体可分为传染性病原体和环境性病原体两类(Bloondson1995)。传染性病原体适应宿主并定植在乳腺，主要有金黄色葡萄球菌、停乳链球菌和无乳链球菌，可以引起亚临床乳房炎，最显著的特征就是被感染后牛奶中体细胞数和上皮细胞数发生明显的变化，由这类病原体导致的乳房炎会在挤奶的时候传染给挤奶前后相邻的其他牛(Rado

6、stitsetal.1994)；环境性病原体寄生在周围环境中，可入侵到乳头和乳池中引起乳腺感染，典型的入侵微生物种类繁多，主要有大肠杆菌、乳房链球菌、变形杆菌、酵母菌或者真菌、绿脓杆菌以及肺炎克雷伯菌等，它们能够迅速引起宿主的免疫反应，并很快被清除掉。感染的病原微生物不同，牛奶中体细胞的种类和数量也有所差异。第二章牦牛Mx1基因、黄牛Mx1和Mx2基因多态性分析2.1试验材料本研究共采集10个青海牦牛和119个中国地方黄牛品种的血样，以调查青海牦牛品种内Mx1基因外显子的多态性和中国地方黄牛品种间Mx1基因和Mx2基因外显子的多态性。中国地方黄牛品种的具体样本信息见表2-1。..2.

7、2试验方法2.2.1试验样本采集与保存血样采集采用颈静脉采血法，先采血10mL，置于预先加入1.5mLACD抗凝剂的离心管中，然后迅速摇匀防止血液凝固，再将采集好的血样快速放置于放有冰块的泡沫箱中带回实验室，保存于-80℃冰箱中待用。由生工生物工程（上海）有限公司合成的引物是干粉状制剂，在使用前需稀释到相应浓度。稀释前以防开盖时粉剂飘出，需先高速离心2~3min，使引物粉末完全沉到离心管的底部，然后再小心打开离心管盖，根据引物合成说明，加入一定体积的去离子