中老年肝细胞癌患者乙型肝炎病毒x基因检测与分析

《中老年肝细胞癌患者乙型肝炎病毒x基因检测与分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、【摘要】目的　检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染后肝细胞癌(HCC)患者血清HBVX基因，并与慢性乙型肝炎、肝硬化患者HBVX基因检出率对比分析。方法　在微孔板上包被HBVX基因片段的捕获探针；PCR扩增被检标本中目的片段，其引物用BioⅡdUTP修饰，在微孔板上杂交后用链霉亲和素碱性磷酸酶系统显色。结果　该方法检测HBVX基因灵敏，特异；乙型肝炎后HCC患者HBVX基因检出率明显高于慢性乙型肝炎组和肝硬化组。结论　检测HBVX基因对HCC具有辅助诊断价值。【关键词】乙型肝炎病毒；X基因；肝细胞癌　　肝细胞癌(h

2、epatocellularcarcinoma，HCC)的主要致病原因之一，是乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)的持续感染〔1〕。在我国，HBV携带者达到全部人口的10%～15%。HBV感染机体以后，存在高比率的慢性化。长期的慢性感染，尤其到达中老年时期常常导致HCC的发生。研究表明，HBVX基因及其表达的蛋白(HBx)能广泛激活病毒与细胞启动子，参与基因调控，与HCC的发生发展密切相关〔2〕。本文应用微孔板杂交技术检测中老年慢性HBV感染者血清中的HBVX基因，对其与HCC的相关性进行研究。　　1

3、　材料与方法　　11　研究对象　　HBV感染后HCC患者30例，其中男23例，女7例，年龄42～71(平均52)岁。慢性乙型肝炎患者25例，男15例，女10例，年龄32～57(平均41)岁。肝硬化患者14例，男8例，女6例，年龄38～64(平均48)岁。全部研究病例均来自北华大学附属医院肝病科住院患者，病例诊断依据为2000年西安第十次全国病毒性肝炎及肝病学术会议制定的《病毒性肝炎防治方案》〔3〕。　　12　实验材料　　HBVX基因扩增引物5′CTGGATCCTTCGCGGGACGTCCTT3′，5′GTT

4、CACGGTGGTCTCCAT3′。5′端修饰BioⅡdUTPHBVX基因引物。PGEMTVectorSystems和JM109Competent：购于Promega公司。NUNCMaxisorp单条可拆微孔板。　　13　实验方法　　基因重组技术制备微孔板包被探针:①应用HBVX基因引物扩增HBVX基因片段。将扩增后的DNA片段回收纯化，并与PGEMTVector连接，转化到JM109大肠杆菌内,选阳性重组体进行扩增，酶切制备HBVX基因片段。紫外定量后，用包被缓冲液配成5μɡ/ml，在NUNCMaxis

5、orp微孔板上每孔加入50μl进行包被，封闭，4℃冰箱保存备用。②HBVX基因检测。主要针对课题中选定的研究对象进行检测血清中的HBVX基因。用5′端修饰的BioⅡdUTP的PCR引物进行基因扩增。扩增后将PCR产物进行变性处理，在微孔板上进行杂交，最后用碱性磷酸酶标记的链霉亲和素显色。应用酶标仪，以405nm波长进行比色，测定每孔吸光度A值。阳性判断标准为：测定孔A值/阴性对照孔A值≥21为阳性。locatedintheTomb,DongShenJiabang,deferthenextdayfocusedon

6、theassassination.Linping,Zhejiang,1ofwhichliquorwinemasters(WuzhensaidinformationisCarpenter),whogotAfewbayonets,duetomissedfatal,whennightcame　　2　结　果　　21　微孔板杂交技术检测HBVX基因　　PCR扩增所得HBVX基因片段如图1，微孔板杂交后检测结果如图2。　　22　各组HBVX基因检测结果　　HCC患者HBVX基因检出率明显高于慢性乙型肝炎和肝硬化患者(P＜0

7、05)，见表1。表1　各组HBVX基因检测结果(略)　　3　讨论　　HBV慢性感染导致HCC，其原因之一是HBVX基因及表达产物HBx作用的结果。HBVX基因是HBV整个基因组中最小的一个开放读码框架(ORF)，编码基因位于1374～1838核苷酸之间，全长为465bp，其编码的X蛋白由154个氨基酸组成。Koike〔4〕等将X基因导入CD1系小鼠的胚胎细胞，诱发84%的鼠的肝脏发生肿瘤并伴有HBx的高度表达，为X基因的致癌作用提供了直接证据。有人认为HBVX基因是病毒的癌基因，在没有基因变异的情况下，X基因能直接

8、诱导HCC的发生〔5〕。本课题结果证实HCC患者HBVX基因的检出率明显高于慢性乙型肝炎患者和肝硬化患者。因此，检测HBVX基因在HCC的诊断上具有重要意义。参考文献：1金倩;氯地酊联合激光治疗痤疮158例疗效观察[J];广东医学;1997年10期2董新亭,李卫莉,张随学;自拟粉刺消治疗痤疮126例[J];中国中医药科技;1999年06期3查旭