肿瘤坏死因子α反义寡核苷酸对鼠单疱病毒性视网膜炎的影响.doc

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1、肿瘤坏死因子α反义寡核苷酸对鼠单疱病毒性视网膜炎的影响【摘要】目的观察不同部位注射肿瘤坏死因子α(TNFα)反义寡核苷酸对实验性单疱病毒性视网膜炎的影响。方法BALB/c小鼠右眼前房注射单纯疱疹病毒1(HSV1)，同时左眼结膜下或玻璃体注射TNFαASON治疗，观察其组织学变化并测定小鼠眼的TNFα含量，比较2种治疗方式的效果。结果试验组小鼠眼TNFα发生视网膜炎的几率及严重度明显减少;玻璃体注射组TNFα含量更低。结论采用作用于TNFα的反义寡核苷酸局部治疗小鼠单疱病毒性视网膜炎,能

2、明显降低感染小鼠眼内细胞因子TNFα的含量,减轻眼内视网膜炎症反应。结膜下注射给药也许是更好的方法。【关键词】视网膜炎;反义寡核苷酸;肿瘤坏死因子;单纯疱疹病毒Ⅰ型　　ABSTRACT：ObjectiveToinvestigatetheeffectoflocaltreatmentwithantisenseoligonucleotides(ASON)targetingtumornecrosisfactorα(TNFα)atdifferentpositionsonexperimentalherpes

3、simplexvirus(HSV)1retinitis.MethodsAfterHSV1(KOS)wasinjectedintherightanteriorchamber(AC)inBALB/cmice,thelefteyesweretreatedwithTNFαASONbysubconjunctivalorvitreousinjection,andthecourseofcontralateralretinitiswasevaluated.TheocularTNFαcontentwasquan

4、tifiedbyELISA.ResultsIntheTNFαASONtreatedeyes,TNFαexpressionandtheincidenceandseverityofretinitiswerereduced.Theeffectofdifferentinjectionsiteswasuncertain.ConclusionASONcanreduceTNFαcontentandalleviatetheinflammatoryreaction.Subconjunctivalinjectio

5、nmaybebetter.　　KEYWORDS：Retinitis;Antisenseoligonucleotides;Tumornecrosisfactor;Herpessimplexvirus1葡萄膜炎是眼科的常见疾病之一，其发病机制尚不完全清楚，病理特征是血房水屏障破坏,蛋白及炎症细胞渗出于血管外以及虹膜睫状体的炎性浸润[1]。近来研究表明肿瘤坏死因子(tumornecrosisfacror,TNF)在炎症反应中起重要作用[2]。为了解TNFα在葡萄膜炎发病机制中的可能作用,我们以反义寡核

6、苷酸(ASON)局部治疗HSVⅠ诱导产生的葡萄膜炎动物模型,并探讨ASON不同注药方式对葡萄膜炎中TNFα含量的影响。　　1材料与方法　　1.1建立模型　　采用BALB/c雌性小鼠，年龄6至8周。动物腹腔麻醉后，右眼前房接种含1×105菌斑形成单位的HSV1磷酸盐缓冲液2μl。建立单疱病毒性急性视网膜炎模型。3　　1.2试验设计　　59只小鼠按随机数字表法随机分为对照组(13只)和试验组(包括结膜下注射组和玻璃体注射组，每组23只)。分别于HSV1感染前1d、感染后1、4d在手术显微镜下,左眼

7、球结膜下或玻璃体腔注射作用于TNFα的ASON约5μl。对照组小鼠注射磷酸盐缓冲液。　　1.3临床与组织学检查　　小鼠注射感染后，双目手术显微镜观察小鼠双眼眼部改变如前房炎性反应、瞳孔扩大、虹膜血管扩张以及眼底白色反光等症状。　　第8日处死所有小鼠，每组取13只鼠左眼固定、脱水和石蜡包埋。切片成5μm后HE染色。400倍光学显微镜观察在睫状体、视网膜、脉络膜的炎症细胞浸润。按视网膜炎的严重程度从0到2+分级：0，没有视网膜炎;1+，仅有内1/3的视网膜有炎症细胞浸润，病变累计范围小于1/2视网膜;2

8、+，炎症细胞浸润视网膜全层，病变累计范围大于1/2视网膜。　　1.4脉络膜视网膜中TNFα含量测定　　取结膜下注射组和玻璃体注射组各10只鼠的左眼，打碎离心处理后收集其上清液，采用标准的酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其细胞因子TNFα的含量。　　1.5统计学处理　　不同组TNFα的含量差异采用t检验方法分析。P<0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1一般表现　　所有HSV1感染小鼠后,右眼均表现为严重的炎症反应：虹膜血管扩张,