《色层分离法》ppt课件

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1、第六章色层分离法6.1概述6.2柱层析6.3纸层析6.4薄层层析色层分离法又称层析法或色谱分离法，它的最大特点是分离效率高，能把各种性质及相近的物质彼此分离。现代的色谱分离技术就是在此基础上发展而来的。色层分离最早是由波兰植物学家M•茨维特提出来的。他在叶绿素的石油醚溶液流经装有碳酸钙的管柱时，发现碳酸钙对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，于是在管柱中出现了不同颜色的色谱带，因此称这种分离方法为色层分离法或色谱分离法。6.1概述层析法的发展史年代发明者发明的色谱方法或重要应用1906Tswett用碳酸钙

2、作吸附剂分离植物色素。最先提出色谱概念1931Kuhn,Lederer用氧化铝和碳酸钙分离a-、b-和g-胡萝卜素。使色谱法开始为人们所重视。1938TaylorUray用离子交换色谱法分离了锂和钾的同位素。1941Martin,Synge提出色谱塔板理论；发明液-液分配色谱；预言了气体可作为流动相（即气相色谱）。1952Martin,James从理论和实践方面完善了气-液分配色谱法。1956VanDeemter提出色谱速率理论，并应用于气相色谱。1957基于离子交换色谱的氨基酸分析专用仪器问世。19

3、58Golay发明毛细管柱气相色谱。1965Giddings发展了色谱理论，为色谱学的发展奠定了理论基础。1975Small发明了以离子交换剂为固定相、强电解质为流动相，采用抑制型电导检测的新型离子色谱法。1981Jorgenson创立了毛细管电泳法。层析分离图示“层析的本质是使一种液体均匀地渗过一个相当细碎的物质的柱体，这些物质通过某种过程有选择地阻留了液体内的某些组分。”——马丁（A.J.P.Martin）（英）一、层析法的条件层析法应具备的因素或条件是：1.具有两相固定相——固定不动的一相流动相

4、——即携带样品流过固定相的流动体。2.混合物中各组分的物理化学性质有差异3.多次展开6.1概述二、层析法的分类⑴根据层析机理不同的划分凝胶层析法——分配层析法——离子交换层析——吸附层析法——吸附剂为固定相，利用吸附能力强弱的差异来分离利用组分在固定相和流动相间分配系数的差异来分离离子交换剂作固定相，利用离子交换亲和力的差异来分离凝胶作固定相，利用对分子大小的筛分作用来分离⑵根据操作技术的划分低压层析技术中压层析技术高压层析技术电泳法——操作压力在0.5MPa-5MPa之间——操作压力在5Mpa-40

5、MPa之间——操作压力小于0.5MPa——靠溶质分子在电场中的移动速度不同而分离二、层析法的分类⑶根据固定相的状态划分：柱层析法——固定相装填在金属或玻璃管中纸层析法——以滤纸为固定相进行层析薄层层析法——把吸附剂粉末铺成薄层作为固定相二、层析法的分类⑷根据流动相的物态不同的分类气相层析法液相层析法气-液层析法气-固层析法液-液层析法液-固层析法二、层析法的分类各种层析法的机理及优缺点类型机理优点缺点适用范围吸附层析化学、物理吸附操作简便易受离子干扰各种生物大分子的分离、脱色和去热源凝胶层析分子筛的排

6、阻效应分辨力高，不会引起变性各种凝胶介质昂贵，处理量有限制分子量有明显差别的可溶性生物大分子分配层析溶质在固定相和流动相中分配系数的差异分辨力高，重复性较好，能分离微量物质影响因子多，上样量太小用于各种生物大分子的分析鉴定亲和色谱亲和色谱生物大分子与配体之间有特殊亲和力分辨力很高一种配体只能用于一种生物大分子，局限性大各种生物大分子聚焦色谱等电点和离子交换作用分辨力高进口试剂昂贵蛋白质和酶6.2柱层析一、吸附柱层析二、分配柱层析柱层析分离的原理示意图柱层析分离的基本原理示意图t1t0t1t2t0t0t

7、3t1t2t0分子量：>>一、吸附柱层析1.原理吸附柱层析是利用吸附剂对混合试样各组分的吸附力不同而使各组分分离。6.2柱层析一、吸附柱层析吸附剂一般是多孔性的微粒状物质，在其表面具有许多吸附中心（或称吸附位置），吸附中心的数量多少以及吸附能力强弱直接影响其吸附性能。当流动相载着溶质A缓缓流过层析柱时，溶质A在固定相和流动相中不断的进行吸附、脱附、再吸附、再脱附的过程。6.2柱层析1、分配系数在一定的温度下，溶质在固定相和流动相之间的平衡关系服从分配定律：KD=Cs/CmKD——为分配系数Cm，Cs分

8、别为流动相和固定相中的溶质A的浓度。应用条件：温度一定低浓度一、吸附柱层析试样中各组分的分配系数有差异，分配系数大的组分，在柱中被吸附得较牢，在固定相中保留的时间较长，不易被洗脱下来，而分配系数小的组分被吸附得较不牢，在柱中保留时间较短，易被洗脱下来。洗脱时，吸附力较强的组分，移动的距离小，后出柱；吸附力较弱的组分，移动的距离大，先出柱。一、吸附柱层析2、吸附等温线吸附等温线：某种组分在吸附剂表面的吸附规律。包括：线形和非线性。（1）线性吸附等温线Cm：