乙型肝炎病毒核心抗原在hepg2细胞膜表达实验的的研究

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1、重庆医科大学硕士研究生学位论文英汉缩略语名词对照英文缩写英文全称AmpAmpicillinAsCasymptomaticcarriersATPAdenosinetriphosphatebpbasepairBSABovineSeriumAlbumintipcalfintestinalalkalinephosphataseCTLcytotoxiclymphocyteDNADeoxyribonucleicacidEDTAEthylenediaminetetraaceticacidE．eoliEscherichiacoliFBSFetalBovineSeru

2、mHBcAgHepatitisBcoreAntigenHBsAghepatitisBsurfaceantigenHBVhepatitisBvirusHepG2HumanhepatocellularlivercarcinomacelllineIPTGIsopropylp-D—I-thiogalactopyranosideminminutePBSPhosphateBufferSalinepHRevilutionsperminuteSRPsignalrecognitionparticalTfRtransferrinreceptor"IrisTris(hyd

3、roxymethyl)aminomethaneX．g面5-Bmmo-4-chlom一3一indolylp—D—galactopyranoside3中文全称氨苄青霉素健康携带者三磷酸腺苷碱基对牛血清白蛋白小牛肠道碱性磷酸酶细胞毒性T淋巴细胞脱氧核糖核酸乙二胺四乙酸大肠杆菌胎牛血清乙型肝炎核心抗原乙型肝炎表面抗原乙型肝炎病毒人肝肿瘤细胞株异丙基．D．D硫代半乳糖苷分钟磷酸缓冲液每分钟转数信号识别颗粒转铁蛋白受体三羟甲基氨基甲烷5一溴_4一氯．3．吲哚⋯13D半乳糖重庆医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及

4、取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得重庆医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意．申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．t—易学位论文作者签名：主兰!至：日期：2竺堡：生：丝学位论文版权使用授权书本人完全了解重庆医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期问论文工作的知识产权单位属重庆医科大学．本人保证毕业高校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为重庆医

5、科大学．学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅．学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，可以采用影印、缩印或其他手段保存论文．论文作者签名：指导教师签名：日期：重庆医科大学硕士研究生学位论文乙型肝炎病毒核，D抗原在HepG2细胞膜表达的实验研究摘要目的制备乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)c基因和编码转铁蛋白受体(transferrinreceptor，TfR)不被裂解的内部信号．锚定序列基因的融合基因，将带有此融合基因的质粒转染人肝肿瘤细胞株(Humanhepatocellu

6、larlivercarcinomacellline，HepG2)细胞，观察带有疏水段的HBcAg在细胞膜上的表达情况，探讨船cAg能否通过获得疏水段实现膜表达，以及膜表达的I-113cAg是造成慢性乙型肝炎患者肝细胞损害时靶抗原的可能性，为研究慢性乙型肝炎的发病机制提供实验室依据，为进一步的免疫学实验提供细胞模型。方法1．扩增质粒pcDNA3．1(．)一HBcAg；2．通过重叠序列引物的设计与多聚酶链反应(polymerasechainreaction，PCR)技术将编码TfR不被裂解的内部信号．锚定序列的60个碱基对(basepair，bp)加到质

7、粒pcDNA3．1(．)．HBcAg中C基因区5’端；3．利用融合基因上、下游的酶切位点，将融合基因与PCDB连接，构建质粒PCDB-Tfr．HBcAg；4．质粒PCDB．Tfr．HBcAg转染HepG2细胞；5．间接免疫荧光法，荧光显微镜下观察Tfr-HBcAg基因在HepG2细胞膜上表达情况。结果成功构建质粒PCDB．Tfr．rmcAg，转染后观察到HepG2细胞膜上出现绿色荧光。4重庆医科大学硕士研究生学位论文结论证实获得疏水段(Tfr)的乙型肝炎核心抗原(HepatitisBcoreAntigen，HBcAg)可以实现膜表达，为探讨HBV前C

8、／C基因能否通过变异而实现膜表达，从而成为慢性乙型肝炎肝细胞损伤的靶抗原提供有力的实验室依据。关键词：FIB