红景天苷调控大鼠颅骨成骨细胞表型表达及相关机制的研究

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1、中图分类号：R782论文编号：HBLH2014-620UDC：密级：公开硕士学位论文红景天苷调控大鼠颅骨成骨细胞表型表达及相关机制的研究作者姓名：王川学科名称：口腔临床医学研究方向：口腔种植外科学习单位：河北联合大学学习时间:3年提交日期:2014年5月10日申请学位类别：医学硕士导师姓名：韩泽民教授单位：河北联合大学口腔医学院王越教授单位：中国人民武装警察部队后勤学院论文评阅人：匿名单位：匿名单位：论文答辩日期：2014年6月8日答辩委员会主席：谢善培教授关键词：红景天苷；大鼠颅骨成骨细胞；低氧诱导因子；增殖；分化；矿化成骨细胞特异性转录因子唐山河北联合

2、大学2014年06月万方数据万方数据ResearchontheMechanismofSALonRegulatingPhenotypicExpressionofRatCalvarialOsteoblastsDissertationSubmittedtoHebeiUnitedUniversityinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyWangChuan(ClinicalScienceofStomatology)PhD.HanZeminSupervisor:PhD.W

3、angYueJune,2014万方数据万方数据独创性说明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论

4、文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：□自授予学位之日起；□自年月日起作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日万方数据万方数据摘要摘要目的通过多次酶消化的方式获取新生24小时大鼠颅骨成骨细胞（ratcalvarialosteoblasts,ROB），并以其为研究模型，观察常氧条件下不同浓度的红景天苷（salidroside,SAL）对成骨细胞增殖、分化和矿化的调控作用，并对其可能的作用机制进行了初步探讨，同时还观察了SAL对成骨细胞低氧诱导因

5、子-1α（hypoxia-induciblefactor-1alpha,HIF-1α）及其下游靶基因血管内皮生长因子（vascularendothelialgrowthfactor,VEGF）的调控作用。方法1利用酶消化的方式获取ROB细胞，通过差速贴壁法纯化ROB细胞，经过活细胞形态学的观察、碱性磷酸酶Gomori钙-钴法染色及矿化结节茜素红染色法来鉴定ROB细胞，取第三代纯化度达90%以上者用于实验。2利用MTS法检测ROB细胞的增殖活性。3利用磷酸苯二钠法，使用碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）试剂盒测定SAL对成骨细胞早期

6、分化的标志性基因ALP活性的影响。4利用反转录聚合酶链式反应（reversetranscriptionpolymerasechainreaction,RT-PCR）法检测成骨细胞晚期分化的标志性基因骨钙素（osteocalcin,OC）、成骨细胞特异性转录因子Osterix（Osx）和Runx2及HIF-1α、VEGF的mRNA表达水平。5利用酶联免疫吸附实验（enzyme-linkedimmnosorbentassay,ELISA）测定OC、VEGF及成骨细胞早、中期分化的标志性基因I型胶原（CollagenType1,Col-1）的分泌水平。6利用茜素

7、红染色和定量分析法检测SAL对ROB矿化功能的影响。结果1获取的ROB细胞经Gomori钙-钴法染色后胞质内有灰黑色的颗粒及块状沉淀出现。ROB细胞经不传代培养13天可形成矿化结节，在倒置显微镜下观察呈黑色不透明区，其经茜素红染色后呈现红色。2SAL可显著促进ROB细胞增殖。3SAL能显著增加ROB细胞中ALP、Col-1及OC的含量促进细胞分化成熟。4SAL能够促进ROB细胞矿化形成矿化结节。5SAL能显著促进成骨细胞分化的特异性转录因子Oterix和Runx2的mRNA转录水平增高。6SAL能上调HIF-1α及其下游靶基因VEGF的表达。结论SAL可以

8、促进ROB细胞增殖、分化及矿化；上述作用可能与SAL上调成骨细胞特