尖吻蝮蛇血凝酶的生化与免疫学特性

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1、硕士学位论文间缩短，说明Ca2+的存在有利于尖吻蝮蛇血凝酶的凝血活性。4．Saculin与人纤维蛋白原作用时，能很快释放出FpA片段，其保留时间为5．3rain，并且随着反应时间的延长，能释放出少量的FpB，其保留时间为7．5min。5．通过免疫新西兰兔成功制各了尖吻蝮蛇血凝酶多克隆抗体，双向免疫扩散实验检测抗体滴度高达l：32，酶联免疫吸附实验测定血清效价高达1：6553600，免疫印迹法鉴定证明该抗体为尖吻蝮蛇血凝酶特异性抗体，其对尖吻蝮蛇血凝酶具有专一性。6．用于尖吻蝮蛇血凝酶临床试验受试者血清抗体检测的间接ELISA法，血清不同稀释度检测结果的变异度均小于5

2、％，说明该方法具有较好的稳定性和重复性。血清经50、100倍稀释时，OD值较低，而5倍稀释时，OD值较高，综合考虑认为采用10倍的稀释倍数较为合理，同时以5倍稀释的结果作为辅助判断。临床试验受试者血清抗体检测的cut．off值为0．401。受试者血清经1：5和1：10稀释后，Saculin试验组和安慰剂组均为阴性结果，说明尖吻蝮蛇血凝酶对于此种临床手术中的常规给药，产生可检测抗体的几率很小，其临床应用中由于此种抗原抗体结合而导致的过敏反应的可能性也较小。关键词：尖吻蝮蛇血凝酶生化特性免疫学特性V硕士学位论文BiochemicalandImmunologicalCna

3、racteristicsolSaCulin●J⋯●■d’●Name：HuangYingSupervisor：PANGJian-xinABSTRACTBackgroundandob]ective：Thrombin-likeenzymes舶msnakevenoms(SV-TLEs)areproteolyticenzymesexhibitamechanismofactionthatresemblesatleaseinparttothrombin．Theseenzymesbelongtoaclassofserineproteasesthatcarl．hydrolyzefib

4、rinogentofibrin，presentinvitrocoagulationandinvivodefibrin(ogen)Iationactivities．SV-TLEshavebeenwidelyinvestigatedbecauseoftheirvalueonclinicalapplication，suchasReptilase@，ahcmostaticmanufacturedinSwiss，purifiedfromBothropsatroxsnakevenom，hasbeenwidelyusedinhemorrhagicdiseaseandprevent

5、ingforsurgicalbleeding．ThefirststudyofTLEsfromAgkistrodonacutussnakevenominChinawereChengHCandOuyangCela1．in1967，theyextractedtwoTLEsiIl1971and1972，respectively．Bothofthemshoweddifferentdegreesofanticoagulationactivityi11animalexperiments．TangSSeta1．hadtriedtoseparatefivenewTLEsfromAgk

6、istrodonacutussnakevenomfrom1993to2005，andtherelatedresearcheshadbeenperformed．HaemocoagulaseAgldstrodonalsoisasnakevenomthrombin-likeenzymepurifiedfromAgkistrodonacutu$snakevenom，andcurrentresearchesshowthatithasagoodhemostaticeffect．HaemocoagulaseAgkistrodonforInjection(Saculin圆)Wasm

7、arketedasanationalfirstclassdrugbyBeijingKonruasPharmaceuticalCo．LTDin2009．Saculinisbyfarasolesinglecomponenthemostaticfromsnakevenomwhichhasallaminoacidsequence，andperformsagoodeffectivenessinhemostasis．1essi11adversereactionsandhasagooddrugABSTRACTtolerance．Inthisresearch，biochemic