四种水产药物对牙鲆paralichthys olivaceus肝细胞色素p450酶影响研究

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1、上海海洋大学硕士学位论文四种水产药物对牙鲆（Paralichthysolivaceus）肝细胞色素P450酶影响的研究姓名：韩华申请学位级别：硕士专业：临床兽医学指导教师：李健20090512上海海洋大学硕士学位论文四种水产药物对牙鲆(Paralichthysotivaceus)肝细胞色素P450酶影响．的研究摘要细胞色素P450酶(CYP450)是与动物体内药物代谢关系最为密切的药物代谢酶，其活性的诱导和抑制往往会导致药物的相互作用，从而可能产生水产药物残留或影响药物疗效，严重威胁水产品安全。然而，‘关于水产药物对鱼类CYP450活性诱导和抑制的报道却非常少。本文以此为切入点，以重要的近

2、海养殖经济鱼类牙鲆为研究对象，在不同水平上研究了水产用药物对该酶的活性及表达的影响。研究分为两部分：第一部分：研究了三种水产用喹诺酮类药物(FQ)氟甲喹、恩诺沙星和诺氟沙星对牙鲆肝组织中氨基比林N．脱甲基酶(APND)、红霉素N。脱甲基酶(ERND)和7．乙氧基异吩嗯唑酮．脱乙基酶(EROD)活性的影响；以及利用半定量PCR方法研究了上述三种药物对CYPlA基因表达的影响。结果表明，和对照组相比，三种喹诺酮类药物对牙鲆肝S9中APND、ERND、EROD酶活性均具有抑制作用，其中恩诺沙星和诺氟沙星组3种酶的活性极显著下降(尸<0．01)，而氟甲喹组中，APND、ERND酶活性显著下降俨<0

3、．05)，EROD酶活性极显著下降(尸<0．01)。提示这3种FQ药物牙鲆CYP450酶具有广泛的不同程度的抑制作用。RT-PCR结果表明，各药物组的CYPIA在mRNA水平上发生了下调，且3种药物影响表达下调的大小为，恩诺沙星>诺氟沙星>氟甲喹，结合药物对CYPlA依赖的EROD酶活性抑制的结果，发现3种不同喹诺酮类药物对CYPlA酶活性及CYPlA基因表达的影响具有基本一致的效果，表明这3种药物作为抑制剂对CYPlA的抑制机制可能是抑制酶蛋白的合成，即可能是通过抑制CYPlA的表达，从而减少蛋白质翻译，抑制了CYPlA酶蛋白合成，导致CYPlA酶活性下降。第二部分：以中药黄芩苷作为受试

4、药物，研究其在不同剂量和作用时间下对牙鲆肝CYP450酶活性及CYPlA基因表达的影响。采用体内实验，将黄芩苷分别按tk￡(50mg／kg·d)、中(100mg／kg·d)和高(200mg／kg·d)--"个剂量连续口灌牙鲆，并于给药3、6、9天后取样。酶活性结果表明：给药3天，较空白组而言，黄芩苷各剂量组的如ND、ERND、EROD酶活性没有明显变化；给药6天，高中剂量组的APND、EROD酶活性极显著增(尸<0．01)，ERND酶活性显著下降俨<0．05)，1上海海洋大学硕士学位论文中剂量组的APND酶活性极显著增N(P

5、剂量组的APND、EROD酶活性极显著增加，ERND酶活性极显著下降俨

6、在mRNA水平上都发生了上调，且这种表达的上调同CYPlA酶的活性一样随用药时间和剂量的增加而加强，说明黄芩苷作为诱导剂对CYPlA的诱导机制可能发生在转录水平上，可通过诱导CYPlA的表达而增强CYPlA酶的活性。关键词水产药物，牙鲆，细胞色素P450，酶活，基因表达II上海海洋大学硕士学位论文EffectsoffouraquaculturaldrugsonhepaticcytochromeP450inParalichthysolivaceusABSTRACTCytochromeP450enzymeshavetheclosestrelationshipwiththedrug—metabo

7、lizingenzymesinanimals．Drug-drug．interactionsinfishwhicharegenerallyassociatedwiththeinductionandinhibitionofCYP450activitymayleadtotheformationofaquacutturaldrugsresiduesorinfluencethedrugeffect，andthusthreatent