a族链球菌上调a20表达以抑制巨噬细胞功能的机制研究

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3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19当日才≮⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯ly附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27结{沧⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．44中文摘要A族链球菌上调A20表达以抑制巨噬细胞功能的机制研究摘要目的：A族链球菌(GroupAstreptOCOCCUS，GAS)即化脓性链球菌，一类重要的G+致病菌，它可以引起多种不同的化脓性疾病和非化脓性感染后遗症的产生。巨噬细胞是固有免疫中的主要效应细胞，通过其模式识别受体(PI汛)与细菌表面的病原相关分子模式(PAMPs)结合产生效应。其中模式识别受体TLR活化后可以与接头蛋白MyD88作用，进一步激活T

5、RAF6来调节NF．KB和MAPKs信号通路。NF。rd3激活后转位入核，通过诱导转录因子、急性期蛋白和细胞因子等多种物质的表达来调控免疫反应以适应细胞生存。锌指蛋白A20是一种免疫负调节因子，在多种细胞受到LPS、TNF、CD40等刺激后可大量表达，以发挥双重泛素化酶作用。既能介导目的蛋白被蛋白酶体降解，又能抑制泛素化依赖信号的传导。其泛素化作用的底物包括：TRAF2、TRAF6、IKK、Caspase8、RIPl等。本室前期研究表明：GAS作为G+菌其活化巨噬细胞的炎症反应较G．菌微弱而迟滞，同时还伴随负调节蛋

6、白A20的高表达。1为了探究这种高表达的负调节蛋白，是否与其导致的炎症反应低下相关，本研究中以E．coli作为G．菌的对照，GAS刺激鼠源巨噬细胞RAW267．4后分别检测细胞因子、NF．rd3、TRAF6及A20在不同时间点核酸以及蛋白水平表达的差异。2为进一步证实A20高表达与炎症反应低下有关，A20SiRNA借助脂质体瞬时转染RAW264．7细胞，通过形成RNA诱导的沉默复合物(RNA．inducedsilencingcomplex，RISC)，特异性的降解A20的mRNA，从而导致其转录后基因沉默。3用GA

7、S感染A20SiRNA预处理后RAW264．7细胞，检测细胞因子、NF．1①、TRAF6基因和蛋白水平的变化，对比A20SiRNA预处理组和不同对照组之间的差异，为GAS感染后通过巨噬细胞介导微弱而迟缓的炎症反应，来逃避宿主固有免疫系统的清除作用提供理论依据。4为了探究GAS感染巨噬细胞后A20的高表达是否与MyD88通路激活相关，用GAS或E．coli刺激MyD88．／．C57BL／6鼠和野生C57BL／6鼠BMDM细胞后，应用Westernblot检测NF．1(B、TRAF6、A20表达的变化。中文摘要方法：1

8、RAW264．7细胞分别接受GAS或E．coli刺激，用Real．timePCR、CBA检测细胞因子IL．1p、IL．6、TNF．0【、IL．10的动态表达变化。2应用Westernblot检测NF。1cB、TRAF6、A20在GAS或E．coli分别刺激RAW264．7细胞和野生C57BL／6鼠BMDM细胞后不同时间点的变化情况。3应用RNA干扰技术，借助