cxcr4启动子调控的条件复制型腺病毒抗前列腺癌细胞的实验研究

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1、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得直昌大堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名(手写)：签字日期：h7碑钿f日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

2、行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所和中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)17^＼学位论文作者签名(手写)：衅导师签名(手写)：0髟气Irf，签字日期：知，弓年6月b日签字日期：如B年6月6日摘要前列腺癌是西方国家常见的恶性肿瘤，我国前列腺癌的发病率虽比西方国家低，但随着人们生活水平的提高及生活习惯的改变，近年来前列腺癌发病率呈不断上升趋势，成为影响我国老年男性生活质量及

3、预期寿命的重大疾病。在前列腺癌治疗中，尽管大部分前列腺癌在早期治疗中疗效显著，但是部分表现出较强的侵袭性、易复发甚至出现转移，内分泌治疗晚期几乎都出现激素抵抗，治疗这些前列腺癌使用现有的治疗方式往往会显得捉襟见肘。近年来，随着分子生物学研究的进展，基因治疗逐渐成为肿瘤学研究的热点，呈现出良好的应用前景。如何使得基因治疗对肿瘤的选择性强，对正常细胞干扰小，对晚期肿瘤或转移瘤灶仍有效等理念，越来越受到人们的重视。目前，具有在特定肿瘤细胞中条件性增殖复制并最终裂解肿瘤细胞的条件型溶瘤腺病毒，引起了人们极大关注，溶瘤病毒用于肿瘤治疗的研究发展非常迅速。溶瘤病毒不但自身在肿瘤细胞内复制导致细胞溶解

4、和死亡，而且通过受感染的细胞释放出更多的病毒颗粒，产生一种级联放大效应，直至肿瘤细胞被清除。目前已可利用基因工程手段使溶瘤效应更加具有特异性和条件性，溶瘤腺病毒可以针对不同肿瘤加载其肿瘤特异性启动子，使得溶瘤病毒仅在特异的肿瘤组织中保持高活性，发挥溶解肿瘤细胞的功效。趋化因子受体CXCR4是近年来肿瘤研究领域中的热点，趋化因子受体CXCR4属于趋化因子受体家族，是一个具有352个氨基酸且高度保守受体蛋白，为七次跨膜的G蛋白偶联膜受体，已被证实在多种肿瘤细胞中高度特异性表达。目前，已有研究证实CXCR4启动子在。肾癌和神经胶质瘤中呈现肿瘤特异性，这提示CXCR4启动子极有可能成为前列腺癌基

5、因治疗中肿瘤特异性启动子的候选者。因此，本研究重点评价并比较CXCR4启动子调控的条件复制性腺病毒Ad．CXCR4．E1对前列腺癌细胞生长抑制的情况，分为如下部分：第一部分CXCR4在前列腺癌细胞与前列腺上皮细胞中的表达差异目的：观察趋化因子受体CXCR4在前列腺癌细胞LNCaP、PC．3、前列腺上皮细胞RWPE—l中的表达，探讨趋化因子受体CXCR4在癌细胞和正常细胞系II摘要的表达差异。方法：常规培养前列腺癌细胞LNCaP、PC．3、前列腺上皮细胞RWPE．1，通过采用半定量RT-PCR法检测LNCaP、PC．3、RWPE．1中CXCR4基因在转录水平上韵表达情况，Westernbl

6、ot印迹检测CXCR4在LNCaP、PC．3、RWPE．1细胞中转录后水平的表达情况。结果：三种细胞中都可以检测到CXCR4的表达，但在前列腺癌细胞中，CXCR4存在高水平的表达(p<0．01)。对于前列腺癌各细胞之间，CXCR4的表达水平为LNCaP>PC．3(P<0．05)。结论：通过三种细胞系的比较，前列腺癌细胞LNCaP及PC．3中存在CXCR4高表达，提示前列腺癌细胞中存在CXCR4特异性高表达。第二部分CXCR4启动子的克隆及其在前列腺癌细胞中转录特异性分析目的：评估CXCR4启动子在前列腺癌细胞中的特异转录活性。方法：采用PCR方法扩增CXCR4启动子序列，将其克隆到含有报

7、告基因红色荧光蛋白的质粒载体pDsRed2．1和含有荧光素酶(LUC2)的质粒载体pGL4．17，经脂质体分别转染前列腺癌细胞LNCaP、PC．3和前列腺上皮细胞RWPE．1。荧光显微镜下观察DsRed2的表达情况，并测定CXCR4启动子在三种细胞中的荧光素酶活性。结果：CXCR4启动子仅在前列腺癌细胞中表现出特异的转录活性，其中LNCaP中启动子活性高于PC．3(P<0．05)。前列腺上皮细胞RWPE．1中几乎观测不到DsRed2