山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究

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1、王艳山奈酚抗胃癌及调节树突状细胞功能的实验研究。摘要背景胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其病死率较高。近几年来，中药抗肿瘤的研究已经成为国内外的研究热点。研究发现，黄酮类化合物能够有效的抑制肿瘤的发生发展，我校中西医结合实验室多年来致力于半枝莲药物的抗肿瘤的研究，发现半枝莲的有效成分能够通过多种机制抑制肿瘤的生长。本研究选取的研究对象为中药单体山奈酚，是半枝莲的活性成分之一。已有报道山奈酚具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导其凋亡的作用，但山奈酚在胃癌中的研究较少见。目的l、观察山奈酚对胃癌SGC一7901细胞的增殖及凋亡方面的影响，并初步探讨其机制；2、探讨山奈酚对胃癌患者外周血

2、来源的树突状细胞的功能的影响。方法结果MTT法检测山奈酚对SGC．7901细胞的增殖的影响，流式细胞术检测山奈酚对SGC一7901细胞凋亡的影响及其诱导凋亡的机制；酶联免疫吸附实验(ELISA)及细胞免疫荧光实验检测山奈酚对胃癌细胞分泌和表达VEGF的影响；流式细胞术检测山奈酚对SGC．7901细胞表面MHCI类相关抗原(MICA)的表达的影响；用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离胃癌患者，获得外周血单个核细胞(PBMC)，加入GM．CSF、IL．4诱导出树突状细胞(DC)；流式细胞术检测山奈酚对DC表面HLA．DR分子、CD86分子的表达的影响，以及对未成熟DC(iDC)

3、吞噬能力的影响。山奈酚能够抑制SGC一7901细胞增殖：不同浓度的山奈酚，均能抑制SGC．7901细胞的增殖，与溶媒组比较有显著差异性(P<0．05)，且具有剂量、时间依赖性(尸<0．05)。山奈酚诱导SGC-7901细胞的凋亡：山奈酚6099／ml、18099／ml的浓度作用于细胞12h后，细胞凋亡率明显高于溶媒组，具有剂量依赖性(P<0．05)。山奈酚增加SGC．7901细胞内活性氧(ROS)的水平：山奈酚(20、40、80pg／m1)作用于细胞12h后，细胞内的ROS水平较溶媒组增加，具有统计意义，有、123扬州大学硕士学位论文结论剂量一效应关系(Jp

4、奈酚抑制SGC．7901细胞VEGF的分泌和表达：ELISA实验显示山奈酚能够剂量依赖性的抑制胃癌细胞VEGF的分泌(P<0．05)，细胞免疫荧光实验结果显示细胞内的VEGF的表达水平也随着药物浓度的增加而减低。山奈酚下调SGC一7901细胞表面的MICA的表达：与阴性组相比，山奈酚20I．tg／ml、80I_tg／ml处理细胞24h后，细胞表面的MICA表达降低，具有显著差异性(尸<0．05)。山奈酚抑制DC的成熟：山奈酚能够下调DC表面HLA．DR分子和CD86分子的表达，与阴性组相比有统计学意义(P<

5、0．05)。山奈酚处理后的SGC．7901细胞能够增加iDC的吞噬能力：山奈酚作用于细胞12h后，与iDC共培养后，较阴性组比易被iDC吞噬，山奈酚的浓度越高，就越容易被iDC吞噬(P<0．05)。l、山奈酚有抑制SGC一7901细胞的增殖，诱导细胞凋亡的作用，凋亡机制可能与增加细胞内ROS的释放水平有关。2、山奈酚能够下调SGC一7901细胞的VEGF表达，抑制SGC一7901细胞表面MICA抗原的表达。3、山奈酚对胃癌患者PBMC诱导来源的DC成熟有抑制作用，但山奈酚处理后的SGC．7901细胞易被未成熟树突状细胞吞噬。关键词山奈酚；胃癌；凋亡；血管内皮生长因子；树突状

6、细胞ExperimentalstudyoneffectsofkaempferolagainstgastriccanceranditsregulationofdendriticcellactivitiesBackgroundAbstractGastriccancerisoneofthemostcommonmalignancywithhighmortalityintheworld．Recently，TraditionalChinesemedicineonanti．tumorresearchhasbecomearesearchfocusathomeandabroad．Rencen

7、tresearchshowsthatflavonoidscaneffectivelyinhibitthedevelopmentoftumor．Theanti-tunlorstudiesofScutellariabarbatahavebeendiscussedbyChineseandWesternintegrativemedicinelaboratoryinourschoolformanyyears．TheyshowthattheseactiveingredientsofScutellariabarbatacansu