mir-1904在小鼠胚期发育中的表达及其功能初探

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1、硕士学位论文miR-1904在小鼠胚期发育中的表达及其功能初探THESTUDYONEXPRESSIONOFMIR-1904INEMBRYODEVELOPMENTANDAPRELIMINARYSTUDYOFITSFUNCTION李保哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：Q71学校代码：10213国际图书分类号：577.21密级：公开理学硕士学位论文miR-1904在小鼠胚期发育中的表达及其功能初探硕士研究生：李保导师：吴琼教授申请学位：理学硕士学科：生物学所在单位：生命科学与技术学院答辩日期：

2、2015年6月授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIndex:Q71U.D.C:577.21DissertationfortheMasterDegreeinScienceTHESTUDYONEXPRESSIONOFMIR-1904INEMBRYODEVELOPMENTANDAPRELIMINARYSTUDYOFITSFUNCTIONCandidate：LiBaoSupervisor：Prof.WuQiongAcademicDegreeAppliedfor：MasterofScience

3、Speciality：BiologyAffiliation：SchoolofLifeScienceandTechnologyDateofDefence：June,2015Degree-Conferring-Institution：HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学理学硕士学位论文摘要伴随发育生物学相关技术及理论的不断发展，miRNA作为表观遗传学的重要研究热点，愈来愈受到广大科学家的关注。miRNA广泛参与到各种复杂的调控通路中，并且对发育进程中的各种关键事件以及

4、多种疾病发生都有着重要影响。本课题所研究的miR-1904，定位于小鼠13号染色体上Pde4d基因的第8内含子中。Pde4d基因的翻译产物能够通过水解细胞内的环腺苷酸（cAMP），参与到cAMP/CREB和cAMP/EPAC细胞信号通路中并发挥作用，对动物机体生理健康影响巨大。据有关研究，内含子miRNA有可能对宿主基因的表达产生协同或者拮抗作用。miR-1904宿主基因Pde4d相关的研究非常多，但是关于miR-1904的相关研究却比较少。因此本课题首先对小鼠胚期miR-1904的表达谱进行研究

5、，以探讨小鼠胚胎miR-1904的时空表达模式；然后，通过对怀孕母鼠尾静脉注射miR-1904慢病毒载体进行活体实验，对孕鼠及子代胚胎的各项指标进行检测，借此研究miR-1904对小鼠发育的影响；最后，在活体实验中选取miR-1904特异性表达的器官作为模型，初步探讨miR-1904和Pde4d的调控关系。在对小鼠胚期miR-1904的表达谱的研究中发现，miR-1904在小鼠胚期存在着特异性的表达模式，主要集中在各类神经组织、以及主要的内脏器官，其中在整个胚期一直保持较高水平表达的是脑、脊椎、背

6、根神经节等大部分神经组织以及嗅觉外皮层，此外肺脏和肾脏中表达也维持比较高的水平；而肝脏、心脏等器官中miR-1904的表达水平则随时间而波动较大。在活体实验中，尾静脉注射miR-1904慢病毒载体后，孕鼠体重低于正常水平，肺脏脏器系数偏大，同时引起孕鼠中与血液循环相关器官（心脏、肺脏、肝脏以及肾脏）形态的异常；子代胚胎的异常率升高，子代胚胎变小并延缓了发育，特别是肺脏和肾脏发育异常情况更加突出。子代胚胎肺脏和肾脏中的miR-1904表达水平显著升高，证明miR-1904慢病毒载体能够借助孕鼠的血液

7、循环系统，通过血胎屏障并作用于子代胚胎。通过软件预测及荧光素酶报告实验初步证明miR-1904能够靶向Pde4d，利用子代胚胎中miR-1904特异性表达的肺脏和肾脏为模型，发现过表达miR-1904并不能影响Pde4d在转录水平上的表达差异，但是在肺脏中发现了Pde4d蛋白下调的现象，说明过表达miR-1904在翻译水平上抑制Pde4d表达。关键词：miR-1904；内含子RNA；胚胎发育；尾静脉注射-I-哈尔滨工业大学理学硕士学位论文AbstractWiththedevelopmentofre

8、searchonepigenetics,peoplegraduallyrealizetheimportanceofmiRNA.miRNAparticipatesinavarietyofcomplexregulatorypathways,andhasimportantimplicationsforkeyeventsandtheoccurrenceofavarietyofdiseasesinthedevelopment.Inthisstudy,miR-1904islocatedonmo