toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究

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1、系nISOOCHOWUNIVERSITY硕士专业学位论文论文题目Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究有B-士士P研究生姓名n指导教师姓名叶文学副教授专业名称胸心血管外科研究方向心、肺移植的基础与临床研究论文提交日期2015年5月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明；所提交的学位论文是本人在导师的指导下，狯立进行研究工作所取得的成果。除文屮已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方

2、式标明。本人承担本声明的法律责任。日期：苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研宄所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在年—月解密后适用本规定。非涉密论文口论

3、文作者签名：/U

4、…日期：灿-十1导师签名：日期：Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究中文摘要Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究中文摘要目的：在心脏移植后，急性血管性排斥反应导致心肌细胞间质出血、水肿，周围中性粒细胞浸润，血管内皮细胞死亡，最终细胞凋亡。本实验拟研究Toll样受体通路及其下游通路核因子-κB（NF-κB）在心肌细胞凋亡中的作用。方法：在体外培养C57BL6小鼠的心肌细胞及SD大鼠和BALB/C小鼠的脾细胞。在体外建立C57BL6小鼠到BALB/C小鼠和SD大鼠的心脏移植细胞模型。

5、将实验分为六组，A组：C57BL6小鼠心肌细胞+PBS液(PBS组)；B组：C57BL6小鼠心肌细胞+TNF-α(TNF-α组)；C组：C57BL6小鼠心肌细胞+BALB/C小鼠脾细胞(MouseSC组)；D组：C57BL6小鼠心肌细胞+BALB/C小鼠脾细胞+BALB/C小鼠血清(MouseSC+S组)；E组：C57BL6小鼠心肌细胞+SD大鼠脾细胞(RatSC组)；F组：C57BL6小鼠心肌细胞+SD大鼠脾细胞+SD大鼠血清(RatSC+S组)，共培养时间为108h。运用Annexin-V/PI法检测各组C57BL6小鼠心肌细胞凋亡，比较同种和异种免疫

6、原对心肌细胞刺激效应的差别。RT-PCR法检测A组、C组、D组、E组、F组心肌细胞TLR-1、TLR-2、TLR-3、TLR-4、TLR-5、TLR-7、TLR-9的表达，筛选出被激活的Toll样受体。利用相应的Toll样受体的阻断抗体抑制激活的Toll样受体，Annexin-V/PI法检测心肌细胞凋亡，Western-blot法检测其下游通道NF-κB的表达变化。结果：运用酶消化法培养C57BL6小鼠的心肌细胞，细胞活性好，纯度达80-90%。供心心肌细胞凋亡检测实验中，TNF-α组、RatSC组、RatSC+S组的心肌细胞凋亡比例达71.31±7.71

7、%、70.05±5.73%、68.61±4.71%，与PBS组、MouseSC组、MouseSC+S组相比，心肌细胞凋亡程度有明显差异（P<0.001）。检测未经处理的C57BL6小鼠心肌细胞的各Toll样受体信号的表达，均在相对较低水平，呈静息状态。各实验组中，在RatSC组和RatSC+S组心肌细胞的TLR-2和TLR-3的表达明显增高I中文摘要Toll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究（P<0.05），其中TLR-3的增高更加明显（P<0.05）。运用TLR-3抗体来抑制心肌细胞TLR-3信号通路后，供心心肌细胞的凋亡比例减少

8、（P<0.05），NF-κBp65蛋白的表达量降低（P<0.05）。结论：1.在小鼠-大鼠心脏移植细胞模型中，TLR-2和TLR-3是异种免疫原诱导的心肌细胞凋亡过程中所激活的主要Toll受体种类，而TLR-3是受激活最明显的受体。2.通过抑制TLR-3受体信号通路的激活，可抑制下游的NF-κB表达，减轻心肌细胞凋亡。关键词：异种移植；心肌细胞凋亡；TLR-3信号通路；TLR-3抗体；核因子-κB作者：郁喆指导老师：叶文学副教授IIToll样受体信号通路对异种心脏移植中的心肌细胞凋亡影响的初步研究英文摘要ThepreliminarystudyforToll

9、-LikeReceptorsexpressioninfluence