细胞分离的前奏密度梯度离心

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1、细胞分离的前奏：密度梯度离心密度梯度离心（densitygradientcentrifugation）是用一定的介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过重力或离心力场的作用使细胞分离。这种分离又可分为速率沉降和等密度沉降两种。速率沉降（velocitysedimentation）主要用于分离密度相近而大小不等的细胞或细胞器。等密度沉降（isopycnicsedimentation）在离心后细胞沉降于密度梯度液中与自身密度相同的密度平衡点，适用于分离密度不等的颗粒。

2、沉降介质应当是无毒的，可在需要的密度和分离介质。它还可以用于制备培养基、核酸范围内形成梯度，pH值和渗透压可以调节，杂交、电泳和免疫研究。FicollPM400的渗在高密度时也不粘稠，并能保持细胞或颗粒的透压性质比蔗糖好，浓度达到50%时密度可完整性。以达到1.2g/ml。因为它的分子量高，且可透析物质含量低，所以FicollPM400通常不会常用的沉降介质有哪些？你是不是马上渗透细胞膜。就想到了Ficoll和Percoll，没错，那可是GE的明星产品之一，已经畅销几十年了。Ficoll在离心时，大家通常

3、会调整培养基的密度是聚蔗糖，常用的Ficoll-400，分子量为40kD，和粘度，让颗粒以合适的速度沉降。合适浓度具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。高浓的蔗糖则渗透压太高，会伤害细胞。而如果你度的Ficoll溶液粘性高，易使细胞聚集，故通换用蔗糖聚合物Ficoll，你就可以得到想要的常使用60g/L的低浓度溶液，密度为1.020，密度，也不会显著增加渗透压。这样你就能够添加比重为1.200的泛影酸钠以增加密度，保持细胞完整，并维持细胞活力。因此Ficoll就形成了平时常用的Ficoll-PaquePLU

4、S。取代了蔗糖用于密度梯度离心，并主要用于常Percoll是一种经聚乙烯吡咯酮涂层(PVP)处规的细胞分离。Ficoll还是分离淋巴细胞的理的硅胶颗粒，对细胞无毒性。利用PercollFicoll-PaquePLUS的主要原料。液经高速离心后形成一个连续密度梯度的原Ficoll-PaquePLUS理，将密度不等的细胞分离纯化。该法是纯化Ficoll-PaquePLUS就是我们经常说的细胞、亚细胞颗粒和大的病毒的一个较好的方淋巴细胞分离液，在市场上销售了30多年，法，但操作流程较长，手续较多。下面我们就从事

5、免疫学研究的人估计都不会陌生。对这些介质进行详细的介绍：Ficoll-PaquePLUS是无菌的、即用型的Ficoll™PM400Ficoll-泛影酸钠，有着合适的密度、粘度和渗FicollPM400是中性、亲水的蔗糖聚合透压，能够简单快速地从人外周血、骨髓和脐物，平均分子量为40kD。一直以来它都被用带血中分离淋巴细胞。它的内毒素水平非常于形成密度梯度，来分离和提取真核细胞、细低，小于0.12EU/ml。胞器和细菌细胞，以及分离淋巴细胞的稳定剂除去了纤维蛋白或抗凝剂处理过的血液www.ebiotrade

6、.com第1页，共14页下一页返回加入Ficoll-PaquePLUS溶液中并离心。离心品的标准。中的差异迁移就导致了溶液的分层，每层包含Ficoll-PaquePREMIUM1.084可用于分了不同的细胞类型。最底层包含Ficoll聚集的离较高密度的人单个核细胞，还可用于分离小红细胞以及沉淀物。紧挨着上面的鼠和大鼠的血细胞，因为啮齿动物的淋巴细胞Ficoll-PaquePLUS一层包含了大部分粒细密度比人的稍大。Ficoll-PaquePREMIUM胞。淋巴细胞因为密度低，最终停留在血浆和1.073则用

7、于分离较低密度的人单核细胞，如Ficoll-PaquePLUS的中间层。这一层还有其基质细胞和单核细胞。他沉淀慢的颗粒，如血小板和单核细胞。吸取Percoll&PercollPLUS中间层，用平衡盐溶液短暂洗涤，以除去血小板、Ficoll-PaquePLUS和血浆，就可以得到Percoll是一种硅胶介质，用于密度梯度单个核细胞。且分离所得的细胞中95±5%为离心分离细胞。该介质的硅颗粒表面有一层聚单个核细胞，细胞存活率>90%，回收率为乙烯吡咯酮涂层(PVP),从而使其渗透压和60±20%。粘度降低。用P

8、ercoll分离细胞时，应在温和的条件下进行，这样有助于多种细胞、亚细胞由于这种方法还可以稍作变动用于很少颗粒和病毒的分离。它渗透压低，很容易用生的血液，因此Ficoll-PaquePLUS还特别适合理盐水、其他平衡盐溶液或细胞培养基调整，从有限的血液（如来源于尸体或小孩）中分离在1.0至1.3g/ml的密度范围内可以形成等渗淋巴细胞。Percoll梯度。该密度范围经最优化设计旨在Ficoll-Paque™PREMIUM系列用