LC-MS联用技术在天然药物化学中的应用

《LC-MS联用技术在天然药物化学中的应用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、18章LC-MS和LC-NMR联用在天然药物化学中的应用报告者：谢凤主要内容1.高效液相色谱（HPLC）2.质谱（ＭＳ）３．核磁共振（ＮＭＲ）４．ＬＣ－ＭＳ在天然产物分析中的应用４.１　定性分析４.１.１　混合物中已知化合物的结构分析４.１.２　混合物中未知成分结构分析４.２　定量分析５.ＬＣ－ＮＭＲ在天然产物分析中的应用６.ＬＣ－ＮＭＲ－ＭＳ的应用７．LC-MS和LC-NMR的应用前景1高效液相色谱法(HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC)1.1高效液相色谱法的产生和发展：高压、高速的现代高效液相色谱仪于1967年面世，导致高效

2、液相色谱法(high-performanceliquidchromatography，HPLC)的产生。薄壳型填料，柱效仅每米1000~3000塔板数5~10μm球型和无定型微粒硅胶，每米5~6万理论塔板数高度均匀甚至单分散1~3μm硅胶基质球形填料，达15~30万理论塔板/m。新型分离模式和方法不断增加1.2高效液相色谱法分类1根据分离原理（1）吸附色谱(adsorptionChromatography)（2）分配色谱(partitionChromatography)（3）离子交换色谱(ion-ExchangeChromatography)（4）体积排阻色谱(sizeEx

3、clusionChromatography)2根据固定相和液体流动相相对极性的差别（1）正相色谱（固定相>流动相）（2）反相色谱（固定相<流动相）1.3高效液相色谱仪现代高效液相色谱使用3~10μm柱填料，为达到适用的流动相流速，高压泵需提供几十MPa或数百大气压力的柱前压。因而HPLC仪器比其他类型的色谱仪要复杂和昂贵。1,2,3,--流动相溶剂储器；4,5,6,--过滤器；7—溶剂比例调节阀和混合室；8—输液泵；9—脉动阻尼器；10—放空阀；11—过滤器；12—反压控制器；13—进样阀；14—色谱柱；15—检测器。1.3.1流动相贮器和溶剂处理系统现代高效液相色谱仪配备

4、一或多个流动相储液器，一般为玻璃瓶，亦可为耐腐蚀的不锈钢、氟塑料或聚醚醚酮(PEEK)特种塑料制成的容器。每个储瓶容积500~2000mL。储液瓶位置要高于泵体，以保持一定的输液静压差，在泵启动时易于让残留在溶剂和泵体中微量气体通过放空阀排出。储器常装有脱除溶剂中溶解的氧、氮等气体装置，这些溶解气可能形成气泡引起谱带展宽，并干扰检测器正常工作。溶剂脱气主要有两种方法，其一是搅拌下真空或超声波脱气；另一种是通入氦或氮等惰性气体带出溶解在溶剂中空气。储液器的溶剂导管入口处装有过滤器，以进一步除去溶剂中灰尘或微粒残渣，防止损坏泵、进样阀或堵塞色谱柱。1.3.2高压泵系统通用HPL

5、C仪输液泵系统的基本要求是：提供(50-500)×105Pa的柱前液压；输出无脉动恒定的液流；流速范围0.1-10mL/min；流速控制精度0.5%或更好；系统组件耐腐蚀(密封性良好的不锈钢或氟塑料)。高压泵产生的液体高压没有爆炸危险，因为液体的压缩性极小。最重要的是系统密封性能好。目前常使用的有三种类型的输液泵，即往复柱塞泵、气动放大泵、螺旋注射泵，它们各有优、缺点。1.3.3进样系统高效液相色谱柱比气相色谱柱短得多（约5～30cm），所以柱外展宽（又称柱外效应）较突出。柱外展宽是指色谱柱外的因素所引起的峰展宽，主要包括进样系统、连接管道及检测器中存在死体积。柱外展宽可分

6、柱前和柱后展宽。进样系统是引起往前展宽的主要因素，因此高效液相色谱法中对进样技术要求较严。进样阀1.3.4高效液相色谱柱色谱柱是液相色谱的心脏部件，它包括柱管与固定相两部分。柱管材料有玻璃、不锈钢、铝、铜及内衬光滑的聚合材料的其他金属。玻璃管耐压有限，故金属管用得较多。一般色谱柱长5～30cm，内径为4～5mm，凝胶色谱柱内径3～12mm，制备往内径较大，可达25mm以上。一般在分离前备有一个前置柱，前置柱内填充物和分离柱完全一样，这样可使淋洗溶剂由于经过前置柱为其中的固定相饱和，使它在流过分离柱时不再洗脱其中固定相，保证分离技的性能不受影响。（1)色谱柱类型按内径大小可大

7、致分为常规分析柱、制备或半制备柱、小内径或微径柱、毛细管柱四种类型。(2)保护柱一般在分析柱前装上较短的保护柱，不仅可除去溶剂中的颗粒杂质和污染物，而且可除去样品中含有与固定相不可逆结合的组分，以保护较昂贵的分析柱，延长使用寿命。(3)柱恒温器对色谱柱严格控制温度可获得重现性更高保留值和更好分离色谱图。(4)柱填充技术根据填料粒径大小采用干法或湿法装柱。粒径大于20μm，采用类似气相色谱的干法装柱，实际上这种方法己很少使用。目前大多数采用10μm以下填料，以称为等密度匀浆湿法装柱。注:1.高压泵，2.压力表，3.排