大鼠CHOP基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析.pdf

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1、第45卷第4期河南大学学报(自然科学版)Vo1．45No．42015年7月JournalofHenanUniversity(NaturalScience)Ju1．2O15大鼠CHOP基因克隆及其在颅脑损伤模型中的表达分析齐麟，李黎，张彤¨(1．河南大学生命科学学院，河南开封475004；2．铁道警察学院，郑州450053)摘要：利用巢式PCR(nestPCR)克隆大鼠CHOP基因．该基因ORF区全长507bp，编码168个氨基酸，推测其分子量为19．03kDa，等电点4．59．大鼠CHOP蛋白在第95～160位

2、氨基酸残基位点存在一个“碱性亮氨酸拉链”结构域．蛋白进化分析显示：大鼠CHOP蛋白与啮齿类该蛋白具有较近的亲缘关系．实时荧光定量PCR结果显示：大鼠早期颅脑损伤中，CHOP基因表达呈逐步上升趋势，颅脑损伤24h表达量达到顶峰，为对照组的11．47倍．关键词：大鼠；CHOP；基因克隆；系统进化；颅脑损伤；实时荧光定量PCR中图分类号：Q786文献标志码：A文章编号：1003—4978(2O15)040458—06CloningandExpressionAnalysisofRatCHOPinBrainInjuryM

3、odelQILin--，IdLi，ZHANGTong1．CollegeofLjeScience．HenanUniversity．HenanKat{eng475004．China2．RailwayPoliceCollege，Zhengzhou450053，China)Abstract：AfulllengthcDNAofratCHOPgenewasisolatedbynestPCRmethod．TheORFofCHOPwas507bp，encoding168aminoacidresidues．Thededucedm

4、olecularweightandP1were19．03kDaand4．59，respectively．A“basicregionleucinzipper”domainwasfoundin95～160aminoacidresiduesofratCHOP．TheproteinphyleticevolutionanalysisindicatedthatratCHOPproteinisacloserelativeofrodentsCHOPprotein．TherealtimeqPCRresultindicatedth

5、attheexpressionlevelofCHOPwasenhancedduringtheearlytimeinrattraumaticbraininjury(TBI)mode1．TheCHOPexpressionlevelof24hafterTBIreachedtothepeakduringtheTBIperiod，andtheexpressionamountwas11timesofthecontro1．Keywords：rat；CH0P；genecloning；phyleticevolution；trau

6、maticbraininjury；realtimeqPCRCCAAT／增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT／enhancerbindingproteinhomologousprotein，CHOP)，又称生长停滞和DNA损伤诱导基因153(growtharrestandDNA—damage—induciblegene153，GADD153)I1]、DNA损伤诱导转录物3(DNAdamageinducibletranscript3，DDIT3)等，作为前凋亡因子口在内质网应激(endoplasmicreticulu

7、mstress，ERS)中起诱导细胞凋亡[4和自体吞噬的重要作用．正常状态下，CHOP在细胞质中低表达量存在．营养缺乏、紫外线、诱导剂等应激状态下，CHOP大量表达并人核发挥生物学功能l7]．细胞应激状态下，内质网蛋白ATF6被活化后进入细胞核内，与CH0P启动子区内质网应激反应元件序列CCAAT—N(9)一cCAcG中的cACG结合，启动CH0P的转录与表达l8]．CHOP蛋白通过下调抗凋亡蛋白Bcl一2的表达、促进活性氧(reativeoxygenspecies，ROS)产生、活化caspase一3等步骤，

8、最终诱导细胞发生凋亡[111]．ERS诱导的凋亡效应在CHOP基因敲除小鼠模型中显著减轻[1．Bcl一2与CHOP存在相互反向调控作用，Bcl一2的高表达抑制CHOP介导的凋亡效应l_1，提示CHOP是ERS诱导的细胞凋亡信号通路中的重要调控分子．颅脑损伤(traumaticbraininjury，TBI)是最常见的机械性损伤和最重要的致死亡原因之一．TBI是一种多细胞、多分子参与的复