实时荧光定量PCR技术在番茄研究中的应用-论文.pdf

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1、天津农业科学死删inAgriculturalSciences2014，20(5)：—一6·植物生理与生物技术实时荧光定量PCR技术在番茄研究中的应用郝志愚，金凤媚，薛俊，宋建(天津市农业生物技术研究中心，天津300384)摘要：随着实时荧光定量PCR技术的不断完善和发展，该技术越来越受到人们的青睐。它以快速、灵敏、高特异性和安全性高等优点广泛应用于科学研究等各个领域。近年来，实时荧光定量PCR技术在番茄的各研究领域不断深入，大大提高了番茄的病害检测能力、特异基因的表达水平和转基因的检测效率。关键词：实时荧光定量

2、PCR；番茄；检测中图分类号：$641．2文献标识码：ADOI编码：10．3969d．issn．1006—6500．2014．05．010ApplicationofReal-timeFluorescenceQuantitativePCRinTomatoHAOZhi—yu，JINFeng—mei，XUEJun，SONGJian(TianjinResearchCenterofAgriculturalBiotechnology，Tianjin300384，China)Abstract：Withthedevelopme

3、ntofreal-timeFluorescenceQuantitativePCRtechnology，moreattentionwaspaidtothetechnology．Itwasafast，sensitiveandhighlyspecifictechnologyandhavebeenusedwidelyinvariousfieldsofscientificresearch．Inrecentyears，real-timeFluorescenceQuantitativePCRtechnologyhasbeen

4、appliedontheresearchoftomato．Itgreatlyimprovedthede—tectionoftransgenictomato，tomatodiseaseandspecificgenesexpression．Keywords：real—timeFluorescenceQuantitativePCR；tomato；determination自PCR技术问世以来，在生物医学领域得到时荧光定量PCR反应中，引入了一种荧光化学物广泛的应用，并不断衍生出许多新的技术使其应质，随着PCR反应的进

5、行，PCR反应产物不断累用泛围不断扩大，特异性和敏感性也不断提高。实计，荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循时定量PCR(Real—timePolymeraseChainReaction，环，收集一个荧光强度信号，这样就可以通过荧光Real—timePCR)技术就是基于PCR技术基础上提强度变化监测产物量的变化，从而得到一条荧光出的川，该技术于1996年在美国AppliedBiosys—扩增曲线图。在PCR指数扩增期间，通过连续监tems公司研究成功。目前，已广泛应用于植物学测荧光信号的强弱来即时测定特异性产

6、物的研究、医学研究、海关检疫等领域_l_。近几年，实量，并据此推断目的基因的初始量[4_。实时荧光定时荧光定量PCR技术也有力地提高了番茄各研量PCR的化学原理可分为两大类：探针类和非探究领域的水平，而且发挥着越来越重要的作用，笔针类，探针类是利用与靶序列特异杂交的探针来者将重点在这方面进行综合论述。指示扩增产物的增加，如TaqMan探针、分子信标等，建立在荧光能量共振转移原理(FRET)上嘲；非1ReahimePCR技术原理探针类则是利用荧光染料或者特殊设计的引物来指示扩增的增加，常用的有SYBRGreen和

7、LC所谓的实时荧光定量PCR就是通过对PCRGreen。前者由于增加了探针的识别步骤，特异性扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检更高，但后者则简便易行。测，从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实由于实时荧光定量PCR技术能在PCR整个收稿日期：2014—02—14：修订日期：2014—03—17基金项目：天津市农业科学院院长基金项目(13014)作者简介：郝志愚(1985一)，男，天津人，研究实习员，主要从事番茄的栽培研究。通讯作者简介：金凤媚(1977一)，女，天津宝坻人，副研究员，硕士，主要从事番茄的

8、分子育种工作。天津农业科学第20卷扩增反应过程监的每一步循环中检测扩增产物扩应用于植物病理学研究。自此之后，这种技术在小增情况，也可以精确定量起始样品的量，因此被麦、水稻、马铃薯等作物的病害上得到了广泛的应认为是一项具有革命性的技术。用。在番茄的病毒病检测中也起到了重要的作用。朱建裕等[111根据番茄环斑病毒fToRSV)各株系2实时荧光定量PCR的特点RNA1聚合酶基因的保守序列，建