大口黑鲈肌肉生长抑制素多克隆抗体的制备及其对仔鱼生长影响.pdf

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1、生物技术通报·研究报告·Bl0TECHNOL0GYBULLETIN2009年第12期大口黑鲈肌肉生长抑制素多克隆抗体的制备及其对仔鱼生长影响张宁宁白俊杰李胜杰叶星何小平夏仕玲杜晓东(中国水产科学研究院珠江水产研究所中国水产科学研究院热带亚热带鱼类选育与养殖重点开放实验室，广州510380；广东海洋大学，湛江524088)摘要：肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)是抑制肌肉生长和发育的生长调控因子。将大口黑鲈(Micropterussalmo—ides)MSTN成熟肽cDNA改造后克隆到pET3

2、2a(+)载体上，构建原核表达质粒，在大肠杆菌BL21中进行表达。SDS．PAGE检测表明重组表达的融合蛋白分子大小约28kD，含量为茵体总蛋白的34％。用纯化后的表达蛋白免疫新西兰兔制备抗大口黑鲈MSTN多克隆抗体，Westernblot和ELISA检测证实所获得的抗体可与抗原蛋白特异性结合，抗体的效价为l：62500。将获得的抗体显微注射到大口黑鲈的受精卵卵黄区，结果显示具有促进仔鱼生长的作用。关键词：大口黑鲈MSTN原核表达多克隆抗体仔鱼生长ProductionofPolyclonalAnti-m

3、yostatinAntibodyofLargeMouthBassandItsEfiectonGrowthoftheLargeMouthBassFryZhangNingning·BaiJunjieLiShen6ieYeXingHeXiaopingXiaShilingDuXiaodong(PearlRiverFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFisherySciences；KeyLaboratoryofTropical＆SubtropicalFishBre

4、eding＆Cultivation，CAFS，Guangzhou510380；GuangdongOceanUniversity，Zhanjiang524088)Abstract：Myostatin，asanegativeregulatorofmyogenesis，inhibitsmyoblastproliferationanddiferentiation．Inthisstudy，large—mouthbass(Micropterussalmoides)myostatinmaturepeptidecDNA

5、wasinsertedintotheexpressionvectorofpET32a(+)，andtrans—formedintoBL21．AfterinducedbyIPTG，therecombinantexpressionproductwasdetectedbySDS—PAGE．Themoleculeweightofmyo-statinfusionproteinwasabout28kDandaccountedfor34％intotalprotein．Thenmyostatinproteinwaspu

6、rifiedandinjectedintorab-bittoproducepo／yclonalanti—myostatinantibody．TheantibodyshowedhighaffinitytotherecombinantmyostatindetectedbyWesternblotandELISAanalysis．Inordertostudythebiologicalactivityofmyostatin，themyostatinantibodywasinjectedintoyolkofoneo

7、rtwocellsstagelargemouthbassembryobymicro—injectiontechnique．Averageweightofthetreatedfishwassignificantlyheavierthanthatofthecorrespondingcontro1．Thesesuggestthatimmunoneutralizationofmyostatinduringembryonicdevelopmentcouldimprovethegrowthperformanceof

8、largemouthbass．Keywords：LargemouthbassMyostatinProkaryoticexpressionPolyclonalanti—myostatinantibodyFryGrowth肌肉生长抑制素(Myostatin，MSTN)是转化生长化。研究表明，经基因敲除技术构建的MSTN因子B超家族的一员，是骨骼肌生长、分化的负调基因突变纯合体小鼠的肌肉量明显增加，并且肌细控因子⋯，主要作用是抑制成肌细胞的增生与