银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、baX的检测.pdf

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1、银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、baX的检测银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、baX的检测银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、bax的检测摘要为了探讨细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas、bax在银屑病发病中的意义，采用免疫组化ABC法、SABC法检测了这几种基因在15例银屑病组织中的表达。结果发现银屑病的角质形成细胞中抑凋亡基因bcl-2几乎不表达，促凋亡基因Fas、bax阳性表达。提示促凋亡基因Fas、bax在银屑病中发病起重要作用，而抑凋亡基因bcl-2作用可能不大。关键词银屑病、cl-2基因、Fas基因、ax基因。银屑病的发病机理尚不明确，

2、角质形成细胞异常增生和角化不全是银屑病的主要病理改变，以往对这方面的研究主要集中在免疫学和生化学方面。近年来银屑病与细胞凋亡的关系逐渐受到越来越多学者的重视。国外有学者报道银屑病表皮中角质形成细胞凋亡异常增多。抑凋亡基因bcl-2和促凋亡基因Fas、bax是现今研究较多、较重要的几个细胞凋亡相关基因。为了探讨这几种基因在银屑病发病中的意义，我们采用免疫组化方法检测了银屑病中细胞凋亡相关基因bcl-2、Fas及bax。1材料和方法1．1标本来源：采用1994-1997年我院保存的石蜡包埋组织块。寻常型银屑病15例，其中男8例，女例；年龄11-68岁，平均年龄1/429.13岁；

3、均为进行期银屑病。6名正常人皮肤组织，皆取自皮肤外科行重睑术、面部美容切除术者的皮肤，石蜡包埋作为对照组。测定前先将石蜡包埋组织块作常规组织切片及HE染色，在光镜下核对诊断，证实其病理诊断无误方采用。1．2试剂：鼠抗人bcl-2单克隆抗体购自Dako公司，生物素化羊抗鼠单克隆抗体系华美生物制品公司产品。兔抗人Fas多抗、兔抗人bax多抗及链酶亲和素-生物素-过氧化酶复合物免疫组化试剂盒（简称SABC试剂盒）均购自武汉博士德生物工程公司。1．3方法：载玻片用APES处理后干燥备用，切取4-5μm厚的石蜡切片，常规脱蜡水化。Bcl-2基因的检测参照ABC法稍加改进，阳性对照为正常

4、淋巴结，阴性对照为不加一抗。Fas、bax基因的检测采用SABC法，阳性对照分别为武汉博士德生物工程公司提供的Fas、bax基因阳性对照片，阴性对照为不加一抗。1．4判断：显微镜下观察，棕黄色为阳性结果。阳性强度判断标准如下：强阳性（）指50以上细胞阳性染色；中等强度阳性（）指25-50细胞阳性染色；弱阳性（）指25以下细胞阳性染色；阴性（-）指细胞均无任何阳性染色。2结果6例正常人皮肤组织中：bcl-2基因除部分基底细胞呈阳性反应外，余阴性。、Fas和bax基因为阴性表达。15例银屑病组织中：bcl-2基因在15例表皮增生的角质形成细胞中均呈阴性表达，但14例部分基底细胞和

5、浸润的淋巴细胞呈阳性染色；Fas基因在12例银屑病组织中呈阳性表达；bax基因在13例中呈阳性，阳性染色遍布表2/4皮各层角质形成细胞中及真皮浅层浸润的淋巴细胞上。在缺少一抗的对照反应中结果均为阴性，而作为阳性对照的正常淋巴结及Fas、bax基因阳性对照片则呈广泛强阳性染色。3讨论cl-2基因最早是1984年Tsujimoto等从滤泡性淋巴瘤中分离出来的一种癌基因，位于18q21位点的bcl-2基因移至免疫球蛋白重链基因14q32位点附近，造成bcl-2蛋白的异常表达。bcl-2基因可抑制许多因素引起的细胞凋亡，故称为：“细胞凋亡抑制基因”。Fas抗原又称Apo-1或CD95

6、，Fas分子是个典型的Ⅰ型膜蛋白，属肿瘤环死因子（TNF）/神经生长因子（NGF）受体家族中的一员。研究发现Fas单克隆抗体在体内体处与Fas结合后均能导致表达Fas的细胞发生凋亡，从而证明Fas是一种识别Fas配体，并将凋亡信息传递给细胞的细胞表面受体，故Fas基因又称“凋亡基因”。Bax基因属于bcl-2基因家族成员，其功能与bcl-2基因相反，为促凋亡基因，bax蛋白可与bcl-2蛋白形成异源二聚体，从而抑制bcl-2基因的抗凋亡作用。我们的实验中正常的皮肤组织部分基底细胞bcl-2基因呈阳性反应，这与国外学者的报道相符合，有文献报道这些阳性细胞为黑素细胞，正常表皮中黑

7、素细胞与基底角质形成细胞的比例为1：30，提示黑素细胞死亡和再生的控制是非常严格的。黑素细胞bcl-2基因强阳性表达，这可能与保护它们避免受内外环境的影响如紫外线的照射，减少凋亡有很大关系。在银屑病中除黑素细胞和浸润的淋巴细胞为阳性外，表皮增生的角质形成细胞均为阴性，这提示bcl-2基因可能在银屑病中所起的作用不大。目前认为在这类丘疹鳞屑性疾病中主要是3/4bcl-X基因起作用。Wrone-Smith等及Foreman等发现银bcl-X1基因在增生的角质形成细胞上呈强阳性表达，认为bcl-X1基因可能通