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1、分类号S855.1学校代码10129UDC号614.4学号2009201080牛支原体PCR检测方法的建立及流行病学调查一起布鲁菌病的调查分析及布鲁菌病检测方法的比较SurveyandAnalysisofanBrucellosisOutbreakandComparisonofMethodsinDiagnosisforBrucellosis申请人：李慧学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：动物传染病学指导教师：关平原教授范伟兴教授论文提交日期：二〇一二年五月摘要布鲁菌是一种不运动的革兰氏阴性的胞内寄生球杆菌
2、，可以在很多真核细胞中存活繁殖。布鲁菌病是由布鲁菌引起的以波浪热或地中海热为特征的高度传播的动物源性疾病，可以感染人以及多种动物。采集中国北方某发生流产的牧场的6577份奶牛血清样品，用虎红平板凝集试验(RoseBengalplatetest,RBPT)、间接酶联免疫吸附试验(indirectenzymelinkedimmunosorbentassay,i-ELISA)、试管凝集试验(standardagglutinationtest,SAT)、竞争酶联免疫吸附试验(competitiveenzymelinke
3、dimmunosorbentassay,c-ELISA)四种方法检测，阳性率为12.56%。采集流产胎儿的肝、脾、肺等12份组织样品进行细菌学试验，结合多重PCR、AMOS-PCR、MLVA确定此次流产为布鲁菌病，分离鉴定布鲁菌为牛种布鲁菌3型。结合背景资料，进一步分析了此次布鲁菌病爆发的原因和特征。用RBPT、i-ELISA、SAT、c-ELISA检测873份奶牛血清，分别检出阳性血清543份、501份、460份、500份，阳性率分别是62.20%、57.39%、52.69%、57.27%。RBPT、SAT与
4、i-ELISA、c-ELISA试剂盒检测结果相比一致率较高,但RBPT有较高的假阳性，SAT有较高的假阴性。在布鲁菌病检疫时可选择特异性好的RBPT抗原进行初筛,阳性结果用i-ELISA或者c-ELISA进行确诊。i-ELISA检测试剂盒在牛种布鲁菌病检测中有着重要作用，尤其适用样品量较大的时候。本试验以c-ELISA为标准，分析比较了Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ三个公司的i-ELISA试剂盒的敏感性和特异性，结果Ⅱ公司的i-ELISA试剂盒敏感性最高。关键词：布鲁菌病；血清学；细菌学；分离鉴定DiagnosisofanBruc
5、ellosisOutbreakandComparisonofMethodsinDiagnosisforBrucellosisAbstractBrucellaisasmallinvasive,non-motile,gram-negativecoccobacillusthatmultipliesandsurviveswithinabroadrangeofeukaryoticcells.Brucellosis,alsoknownasundulantfeverorMediterraneanfever,iscausedb
6、ythisgenusofbacteriaandisstilloneofthemajor,highlytransmissible,zoonoticdiseasesaffectingpeopleandanimals4kindsofserologicaltests,asRoseBengalplaneTest(RBPT)、indirectenzymelinkedimmunosorbentassay(i-ELISA)、standardagglutinationtest(SAT)andcompetitiveenzymeli
7、nkedimmunosorbentassay(c-ELISA)wereusedtodetect6577serumsamplesfromdairycowsonfarmwhereabortedthatinthenorthofChina.Positiverateofserologicaltestwas12.56％.12relativesamplesoflung,liver,spleenetc.inabortedfetusofdairycowwereselectedtoperformbacteriologydetect
8、ionandalsobymultiplexPCR,AMOS-PCR,MLVA.4pathogenicstrainswereisolatedandcultured.ItwasconfirmedasbrucellosisandidentifiedasB.abortusbiovar3.Thecausesandcharacteristicsofbrucellosisoutbreakwereex
