黄芩苷对抗结核药物肝损伤保护作用的实验研究论文

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1、黄芩苷对抗结核药物肝损伤保护作用的实验研究论文王新华金东岭何红梅张延霞时志民赵如同【摘要】目的探讨黄芩苷对抗结核药物肝损伤的保护作用机制。方法将60只小鼠完全随机分为6组，即正常对照组，肝损伤(异烟肼+利福霉素钠)组，联苯双酯组及黄芩苷高、中、低剂量组。给药8d后，分别用光镜和电镜观察肝脏组织细胞病理学的改变情况，用免疫组织化学染色技术分析肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达情况。结果黄芩苷能明显减轻肝细胞变性和坏死，炎症活动程度明显减轻（P0.05或P0.01）；TNF-α蛋白在黄芩苷组小鼠肝脏组织内为弱阳性表达（P0.05或P0.

2、01）；黄芩苷3个剂量组间小鼠肝脏病理形态学及肝脏组织内TNF-α蛋白的表达均无显著性差异（P0.05）。结论黄芩苷对抗结核药物肝损伤的保护作用可能与抑制TNF-α蛋白表达有关。【关键词】黄芩苷；抗结核药物；肝损伤；肿瘤坏死因子-α；免疫组织化学Abstract：ObjectiveToinvestigatetheprotectiveeffectsofbaicalinonthehepaticinjuryinducedbyantituberculosisdrugsinmice.MethodsSixtymicelyinto6groups:n

3、ormalcontrolgroup,liverinjuryisoniazidandrifamycinsodiumgroup,positivecontrolgroup,baicalingroups(high,middleandloinisteredtomiceoncedailyfor8days.Lightmicroscopeandelectronicmicroscopeornecrosisfactor-α(TNF-α)munohistochemistry.ResultsBaicalinalleviatedthedegenerationa

4、ndnecrosisinducedbyantituberculosisdrugsobviously.ThelevelofinflammatoryactivitymunoreactivityofTNF-αproteininlivercellsorphology,theinflammatoryactivityandtheexpressofTNF-αproteinamongbaicalingroups(P0.05).ConclusionTheprotectiveeffectsofbaicalinonhepaticinjuryinducedb

5、yantituberculosisdrugsmayberelatedtoinhibitTNF-αproteinexpression.KeyorNecrosisFactor-α;Immunohistochemistry结核病患者在化疗过程中遇到的最棘手问题之一是应用的抗结核药物对肝脏的损害［1～3］，它可导致化疗中止.freell·(10g)-1·d-1,共8d；肝损伤组腹腔注射0.25%利福霉素钠0.2ml·(10g)-1·d-1和灌胃给予0.3%异烟肼0.2ml·(10g)-1·d-1,共8d；联苯双酯组在给予利福霉素钠和异烟肼(剂

6、量及给药方式同肝损伤组)1h后灌胃给予1.0%联苯双酯0.2ml·（10g）-1·d-1,共8d；黄芩苷分3个剂量组，在给予利福霉素钠和异烟肼(剂量及给药方式同肝损伤组)1h后分别灌胃给予不同浓度(即1.0%,0.5%和0.25%)黄芩苷0.2ml·（10g）-1·d-1,共8d。全部动物末次给药后禁食16h。第9天将小鼠拉颈椎脱臼致死，立即剖开腹腔取出肝脏。2.2肝脏组织病理形态学观察取上述小鼠肝脏右叶部分，以10%中性福尔马林固定，常规石蜡切片，HE染色，光镜下观察肝脏组织病理学变化。炎症活动度计分标准参照王泰龄等［5］提出的慢性

7、肝炎炎症活动度计分方法，分为汇管区炎症（P）、小叶内炎症（L）、碎屑坏死（PN）及桥接坏死（BN，包括分小叶坏死）4项，每项依病变程度分别计为1，2，3，4分，因为PN、BN的严重程度与预后直接相关，因而计分2倍于其他病变，计分公式为：P+L+2×（PN+BN）。2.3肝脏组织TNF-α蛋白免疫组化检测免疫组织化学染色按SABC试剂盒说明书进行。一抗为兔抗小鼠TNF-α。玻片经多聚赖氨酸防脱片处理，小鼠肝组织切片用0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液（pH6.0）进行微波抗原修复，其余步骤按试剂盒说明书进行。DAB显色，苏木精复染，中性树

8、脂封片。以PBS代替一抗做阴性对照。免疫组织化学染色结果用病理图像分析系统分析TNF-α表达情况并测量其灰度值。2.4肝脏组织透射电镜观察取肝组织块切成约1mm×1mm×1mm后，用2.5%戊二醛前固定，1%锇酸后固定，