川佛手总黄酮提取及抗氧化性研究

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1、340一江苏农业科学2010年第3期姜立春，黄成思，杨澈，等．川佛手总黄酮提取及抗氧化性研究[J]．江苏农业科学，2010(3)：340—342川佛手总黄酮提取及抗氧化性研究姜立春，黄成思，杨澈，阮期平(1．绵阳师范学院分子生物学与生物制药重点实验室，四川绵阳621000；2．吉林师范大学，吉林四平136000)摘要：研究药用植物川佛手总黄酮的最佳提取工艺，为该药材质量研究奠定基础。以佛手作为研究材料，采用单因素和正交试验优化了提取工艺，用pH值梯度法和溶剂萃取法对粗黄酮进行了纯化精制，并对其抗氧化性进行了研

2、究。结果表明：川佛手总黄酮的最适宜提取工艺是提取温度60℃，超声功率为420W，提取时间40min，超声提取2次，采用乙醇浓度70％，料液比为1：15。精制后的佛手总黄酮对猪油抗氧化能力较强，其抗氧化能力强于柠檬酸。该提取工艺操作简单，经济省时，方便可行。关键词：川佛手；总黄酮；超声波辅助法；提取工艺；抗氧化性中图分类号：$666．901文献标志码：A文章编号：1002—1302(2010)03—0340—03佛手(bergamot)系芸香科柑橘属植物佛手[CitrusmedicaL．var．sarcodac

3、tylis(Noot)Swingle]的干燥果实。味辛、苦、酸，性温，人肝、胃、肺经。有舒肝理气，和胃止痛之功，用于肝胃气滞、胸胁胀痛、胃脘痞满、食少呕吐等症J，主要分布于热带和亚热带。佛手在我国栽培历史悠久，分布较广，四川、浙江、福建、江苏、广东、广西等省区都有种植。在《中国药典》(2005年版)和其他文献记载中，不同产地佛手均来源于同一种植物，商品佛手因产地不同有广佛手、川佛手、金佛手和建佛手之分。药理实验表明，佛手有解痉与中枢抑制作用、对心血管系统作用、抗过敏和抗炎等作用。黄酮类物质是一类有多种生物学功

4、能特性的物质，广泛用于医药、保健食品中，具有抗菌消炎、抗辐射、调节毛细血管壁的渗透、血管的脆性、防止血管破裂、止血和对紫外线有极强的吸收以及很好的抗氧化等作用。本研究以总黄酮为检测指标，紫外分光光度法为检测手段，利用单因素分析和正交试验设计，对川佛手中总黄酮提取工艺进行了研究，为质量控制以及药理活性等方面研究提供技术依据。1材料与方法1．1材料和仪器川佛手(四川省中江县)、芦丁(上海试剂二厂)、猪油(湿法熬制，市售板油洗净后文火中熬炼而成，装入容器中低温保存)，其他试剂均为分析纯。紫外可见分光光度计(Uhro

5、spec3300pro)，超纯水系统(Milli—Q)，旋转蒸发仪(BuChi)，数控超声波清洗器(KH一600DB)，电子天平(FA1104)，真空干燥箱(DZF一6050)，恒温水浴锅(HH一6)。1．2试验方法1．2．1材料处理将川佛手饮片放入恒温干燥箱内，调节温度5O℃，干燥24h。将干燥后的佛手饮片用药物粉碎机粉收稿日期：2009—10—15作者简介：姜立春(1977一)，男，四川绵阳人，硕士，讲师，从事天然产物和微生物方面的研究。E—mail：jiangjichun@126．COI1]。通信作者：

6、阮期平，博士，教授，从事微生物与生化药学方面的研究。E—mail：rqp2200070@yahoo．corn．vii。碎，将粉末过3号筛，收集过筛后的粉末。1．2．2标准曲线绘制准确称取经干燥恒重的芦丁标准品20．0mg，用浓度30％的乙醇溶解并定容至100mL，摇匀得浓度为0．2mg／mL的芦丁标准液。分别称取此标准溶液0、1．0、2．0、4．0、6．0、8．0、10．0mL于7支25mL容量瓶中。分别于7支容量瓶依续首先加入30％乙醇溶液至l2．5mL，再加入0．7mL质量分数为5％的亚硝酸钠溶液，摇匀

7、，放置6min，然后加入0．7mL质量分数为10％的硝酸铝溶液，摇匀，放置6min，后加入5mL1mol／L的氢氧化钠溶液混匀，最后用30％的乙醇定容至刻度，放置10rain。以蒸馏水为空白参比，于510nm测定吸光度值，以吸光度Y为纵坐标，黄酮浓度为横坐标，绘制标准曲线。1．2．3提取溶剂的选择(1)水提取法。精确称取佛手粉4g共4份，各用20mL石油醚回流2h脱脂去杂质。分别将4份脱脂后的佛手粉用定性滤纸过滤，用石油醚洗脱滤液直至无色，收集滤渣。将滤渣放入烘箱内50℃干燥，收集干燥后的干粉。向干粉中加入蒸

8、馏水，将3份混合物分别放入50、60、70、80℃恒温水浴锅中浸提1h，浸提过程中定时振荡。1h后将浸提液分别过滤，收集滤液得到粗黄酮提取液，然后用旋转蒸发仪浓缩至25mL，准备测吸光度计算提取率和测定提取物中黄酮含量。(2)乙醇提取法。方法见水提取法，其中用冷凝回流装置分别置于50、6O、7O、8O℃恒温水浴锅回流1h，测定提取物中黄酮含量。(3)超声波辅助法提取工艺。方法见水提取法，其中加入70