重组腺病毒对hela、mcf7的转染效率及其介导的htrail基因体外抑瘤作用论文

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1、重组腺病毒对Hela、MCF7的转染效率及其介导的hTRAIL基因体外抑瘤作用论文朴春姬孙晓玲王彬付鑫刘晓丽【摘要】目的研究重组腺病毒感染宫颈癌细胞Hela和乳腺癌细胞MCF7的转染效率，并观察重组腺病毒介导的人肿瘤坏死因子(TNF)相关诱导凋亡配体(hTRAIL)基因对Hela、MCF7生长的影响。方法将Hela和MCF7细胞接种至12孔板，培育24h后加入不同感染滴度的重组腺病毒AdCMVEGFP，用流式细胞仪检测其转染效率;将Hela细胞和MCF7细胞接种至96孔板，24h后转染重组腺病毒AdCMVhTRAIL，72h用四甲基偶氮

2、唑盐(MTT)比色法检测肿瘤细胞的存活率。结果AdCMVEGFP对Hela和MCF7细胞的转染效率在一定范围内随着感染复数(MOI)的增加而增高，转染AdCMVhTRAIL的Hela细胞的存活率明显低于转染AdCMVEGFP的病毒对照组(P0.05)。结论腺病毒对Hela和MCF7细胞均有较高的转染效率，且腺病毒介导的hTRAIL基因对Hela细胞具有明显的体外抗瘤作用。【关键词】Hela;MCF7;肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体;重组复制缺陷型腺病毒;基因治疗Studyonthetransfectionefficiencyofrebin

3、antadenovirustoHelacellandMCF7,andpreliminaryobservationontheinvitroantitumoreffectofhTRAILgenemediatedbyadenovirus【Abstract】ObjectiveTostudytheinfectionefficiencyofrebinantadenovirustouterinecervixcancercellandMCF7,andobservetheeffectonthegroediatedbyrebinantadenovirus.Method

4、sAfterHelacellsandMCF7cellsetry.Theadenovirus(AdCMVhTRAIL)ethod72hlater.ResultsCF7increasedediatedbyadenovirushasantitumoreffectonHelainvitro.【Keyornecrosisfactorrelatedapoptosisinducingligand(TRAIL);Rebinantreplicateddeficientadenovirus;Genetherapy肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体(TNF

5、relatedapoptosisinducingligand.freela公司;酶标仪(BioRad，美国);流式细胞仪(BectonDickinson，美国)。1.2方法1.2.1流式细胞术检测方法确定适宜的感染倍数在12孔板接种5×104个/孔Hela和MCF7细胞，24h后分别以感染复数(MOI)为0、100、1000、3000、5000和10000VP/cell的AdCMVEGFP感染Hela和MCF7细胞。48h后收集细胞，用0.01mol/LPBS洗3次,制成单细胞悬液，用流式细胞仪检测绿色荧光蛋白阳性细胞百分率作为转染效率判断指标

6、，以确定适宜的MOI值。1.2.2MTT法检测重组腺病毒介导的hTRAIL基因对Hela和MCF7细胞生长的影响每种细胞分3组，即Hela(MCF7)、Hela(MCF7)/AdCMVEGFP和Hela(MCF7)/AdCMVhTRAIL。取生长良好的Hela和MCF7细胞，在96孔细胞培养板中接种3×103细胞/孔，每组设5个孔，24h转染重组腺病毒，72h用MTT法检测细胞存活分数。MTT具体方法如下：用PBS配制5mg/ml的MTT溶液，每个待测孔中加入20μlMTT溶液，37℃、5%CO2条件下继续培养4h,并弃掉培养液，每孔加

7、入DMSO150μl，室温下于振荡器上缓慢振荡10min左右至出现均匀的紫蓝色，用酶标仪，选择570nm的波长，用单纯培养液调零后，测定各孔光吸收值(A值)，计算细胞存活分数。细胞存活分数=实验组A570/对照组A570×100%。1.3统计学方法数据以x±s表示，采用SPSS11.0软件包进行t检验。2结果2.1不同感染滴度腺病毒AdCMVEGFP感染Hela细胞转染效率重组腺病毒对两种细胞转染率在0～10000VP/cell范围内随着MOI增加而均增高。MOI值为10000VP/cell时无论是Hela细胞还是MCF7细胞其转染率均达最高，且H

8、ela细胞的病毒转染率均较MCF7细胞高。两种细胞均在MOI值分别为5000和