基于hev中和表位的基因免疫诱导特异性抗体及中和作用研究

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1、基于HEV中和表位的基因免疫诱导特异性抗体及中和作用研究作者：王春玲,杨书才,孟继鸿,王立新【摘要】　　目的：观察基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因免疫是否能在小鼠体内诱导具有中和作用的抗体应答。方法：构建含HEV中和表位p179编码基因的真核表达质粒pVAX179,以肌肉注射法对BALB/c小鼠实施基因免疫，实验组每只小鼠给pVAX179100μg,并设立空质粒pVAX和HEVp179蛋白两个对照组。定期采集小鼠血清,ELISA法检测其特异性抗HEVIgG抗体及其亲合力；以基于PCR的体外中和实验检测抗体的中和活性。结果：pVAX179质粒基因免疫诱导小鼠体内产生了

2、特异性抗HEVIgG抗体,抗体水平于第10周达高峰,OD值为0.55±0.13,与空质粒pVAX组(0.15±0.07)比较差异有统计学意义(P＜0.001)。第6周实验组抗体亲合力(ED50为2.5mol·L-1)高于蛋白对照组（ED50为2.0mol·L-1),基因免疫促进了抗体亲合力的成熟；体外中和实验证实产生的特异性抗体能够阻止HEV感染人肝癌细胞7721,具有中和HEV的活性。结论：基于戊型肝炎病毒中和表位(p179)的基因疫苗pVAX179能够在小鼠体内诱导产生具有中和作用的抗体应答。【关键词】戊型肝炎病毒；中和表位；基因疫苗；抗体应答；中和作用13　　［Abstra

3、ct］Objective：ToinvestigatewhethertheDNAvaccinebasedonHEVneutralizationepitope(s)HEVp179couldinduceneutralizingantibodyresponseinmice.Methods：Theneutralizationepitope(s)HEVp179codinggenewassubclonedintoaeukaryoticexpressionvectorpVAXtoconstructrecombinantplasmidpVAX179.BALB/cmicewereimmunized

4、i.m.with100μgDNAofpVAXp179plasmid,mockDNA,and1μgproteinofHEVp179,respectively.SeracollectedattheindicatedtimesfromtwogroupsweredeterminedthelevelsandavidityofspecificantiHEVIgGantibodybyELISA.TheneutralizingactivityofinducedantiHEVantibodywasdetectedinaPCRbasedcellcultureneutralizationassay

5、.Results:ImmunizationswithpVAX179successfullyinducedantiHEVspecificantibodyresponseandacceleratedtheaviditymaturationofantibodies.TheantiHEVlevelreachedthehightestvaluesabout10weeksafterfirstvaccination.TheavidityofantibodiesfrompVAX179immunizedmicewashigherthanthatfromHEVp179proteinimmuniz

6、edgroup.Inaddition,thepostimmuneseraobtainedfrompVAXp179vaccinatedmicewerefoundtheprotectiveneutralizingactivityagainstHEVinfection.Conclusion：Theseresults13indicatethattheDNAvaccinebasedonHEVneutralizationepitope(s)HEVp179couldinduceneutralizingantibodyresponseagainstHEVinmice．　　［Keyword］he

7、patitisEvirus；neutralizationepitope；DNAvaccine；antibodyresponse；neutralizingactivity　　戊型肝炎病毒(hepatitisEvirus,HEV)是无包膜的单正链RNA病毒,主要通过胃肠道传播,是引发急性戊型肝炎(hepatitisE,HE)的病原体。目前HE尚无特效的抗病毒治疗药物,因此,HEV疫苗的研制受到人们的重视。HEV疫苗的关键是能否诱导具有保护作用的中和