HPLC法测定20种中药饮片中芦丁的含量.doc

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1、HPLC法测定20种中药饮片中芦丁的含量【摘要】目的测定20种中药饮片中芦丁的含量。方法采用反相高效液相色谱法，以HypersilGOLD柱（5μm250mm×4.60mm）为分析柱，乙腈∶水（加磷酸调pH至2.6）（8∶92～30∶70）为流动相，流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温30℃。结果芦丁浓度在（0.0095～0.3800）μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。结论该方法简易准确，重现性好，在本色谱条件及样品处理方法下，可以准确测出该20种中药饮片中芦丁的含量。【关键词】中药；芦丁；高效液相色谱法【Abstract

2、】ObjectiveToestablishHPLCmethodfordeterminationofthecontentofrutinin20kindsofChineseherbalmedicines.MethodsTheHPLCwasconductedonaHypersilGOLDcolumn(5μm，250mm×4.6mm)withacetonitrile-watersolution(8∶92～30∶70).ThesolutionwasadjustedtopH2.6withphosphoricacidandusedasmobilephasew

3、iththeflowrateof0.8ml/min.Thedetectivewavelengthwassetto254nmandcolumntemperatureat30℃.ResultsTheareaunderthepeakofchromatographyisverywellcorrelatedwiththeconcentrationofrutinintherangeof（0.0095～0.3800）μg.ConclusionThismethodissimpleandaccurate.Theexperimentalresultsarevery

4、reproducible.Undertheconditionsasstatedinthemethodsection，therutincanbeseparatedverywellfrom20kindsofChineseherbalmedicines.TheconcentrationoftheRutin，therefore，canbeaccuratelydetermined.【Keywords】Chineseherbalmedicines；rutin；HPLC芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较多见的一种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作

5、用。有关芦丁的HPLC测试方法已有很多报道［1～3］，笔者采用反相高效液相色谱法在50余种常用中药饮片中分离、检测芦丁成分，经在时间轴上（调节色谱条件以使出峰保留时间在10～35min范围内改变）反复与芦丁对照品比较，最后确认其中的20种中药饮片中含有较高的黄酮类物质芦丁。文献曾报道该20种药材中的8种含有芦丁［3，4］，但具体含量不详，笔者查阅国内有关文献，未发现在另12种药材中也含有芦丁的最新报道。实验结果可供有关科研和临床工作者参考。1实验研究1.1仪器和试药Waters高效液相色谱仪，包括510泵，484紫外检测器，680梯度控制器。浙

6、江大学N2000色谱工作站。3芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），50种药材样品分3次每次50种分别购自浙江中医学院实验药厂、浙江省中医院和浙江中医学院门诊部。经浙江中医学院中药鉴定教研室陈锡林副教授和浙江中医学院实验药厂张云副主任药师鉴定并确认。乙腈为色谱醇，磷酸为分析醇，水为纯净水。1.2色谱条件HypersilGOLD柱（5μm250mm×4.6mm）；流动相：乙腈∶水（8∶92～30∶70)，加磷酸调pH至2.6；流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温为30℃。1.3对照品溶液配制精密称取芦丁对照品1.9mg，置10ml

7、量瓶中，加甲醇至刻度，置超声波中振荡溶解，精密吸取该标准溶液0.01ml、0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml，置1ml定量管中，用淋洗液稀释至刻度备用。1.4样品处理取上述三批50种药材的干燥样品各50g，打成粗粉，对应混合，各称取3份，每份2g，置150只100ml大口瓶中，各加50ml甲醇，超声波中振摇15min后浸泡过夜，吸取上清液，经离心，0.45μm滤膜过滤，C18固相萃取器萃取后，用淋洗液稀释5倍待测。1.5定性分析调整流动相中乙腈和水的比例，使芦丁标准品的出峰时间控制在10min左右，取上述各待测样品，吸取5μl进样

8、，初步确定该条件下的样品峰型后，加适量芦丁对照品稀释液于该待测样品中（使样品中的对应芦丁峰面积增大1～2倍），再逐次调整流动相比例，使芦丁的出峰时间从