hplc法测定20种中药饮片中芦丁的含量论文

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1、HPLC法测定20种中药饮片中芦丁的含量论文.freel250mm×4.60mm）为分析柱，乙腈∶水（加磷酸调pH至2.6）（8∶92～30∶70）为流动相，流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温30℃。结果芦丁浓度在（0.0095～0.3800）μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。结论该方法简易准确，重现性好，在本色谱条件及样品处理方法下，可以准确测出该20种中药饮片中芦丁的含量。【关键词】中药；芦丁；高效液相色谱法【Abstract】ObjectiveToestablishHPLCmethodfordeterminationoft

2、hecontentofrutinin20kindsofChineseherbalmedicines.MethodsTheHPLCn(5μm.freelm×4.6mm)obilephasel/min.Thedetectiveandcolumntemperatureat30℃.ResultsTheareaunderthepeakofchromatographyisveryethodissimpleandaccurate.Theexperimentalresultsareveryreproducible.Undertheconditionsasstatedi

3、nthemethodsection，therutincanbeseparatedvery20kindsofChineseherbalmedicines.TheconcentrationoftheRutin，therefore，canbeaccuratelydetermined.【Keyedicines；rutin；HPLC芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较多见的一种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。有关芦丁的HPLC测试方法已有很多报道［1～3］，笔者采用反相高效液相色谱法在50余种常用中药饮片中分离、检测芦丁成分，经在时间轴上（调节色

4、谱条件以使出峰保留时间在10～35min范围内改变）反复与芦丁对照品比较，最后确认其中的20种中药饮片中含有较高的黄酮类物质芦丁。文献曾报道该20种药材中的8种含有芦丁［3，4］，但具体含量不详，笔者查阅国内有关文献，未发现在另12种药材中也含有芦丁的最新报道。实验结果可供有关科研和临床工作者参考。1实验研究1.1仪器和试药250mm×4.6mm）；流动相：乙腈∶水（8∶92～30∶70)，加磷酸调pH至2.6；流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温为30℃。1.3对照品溶液配制精密称取芦丁对照品1.9mg，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度

5、，置超声波中振荡溶解，精密吸取该标准溶液0.01ml、0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.4ml，置1ml定量管中，用淋洗液稀释至刻度备用。1.4样品处理取上述三批50种药材的干燥样品各50g，打成粗粉，对应混合，各称取3份，每份2g，置150只100ml大口瓶中，各加50ml甲醇，超声波中振摇15min后浸泡过夜，吸取上清液，经离心，0.45μm滤膜过滤，C18固相萃取器萃取后，用淋洗液稀释5倍待测。1.5定性分析调整流动相中乙腈和水的比例，使芦丁标准品的出峰时间控制在10min左右，取上述各待测样品，吸取5μl进样，初步确定该条件下的样品峰型

6、后，加适量芦丁对照品稀释液于该待测样品中（使样品中的对应芦丁峰面积增大1～2倍），再逐次调整流动相比例，使芦丁的出峰时间从10～35min不断延后，观察每次进样出峰时芦丁标准峰与样品中的芦丁特定峰是否完全重叠或重叠峰中有肩峰出现，经反复比较，观察全过程中重叠峰形态完好的，无肩峰或样品中的特定峰出现再分离现象的样品，由此确定其芦丁的成分，见图1。图1是苦丁茶样品及加芦丁标准品后的对照图谱。上述50种被测样品中，符合该定性分析要求的样品有20种。A.苦丁茶样品(HerbaCorydalisbungeanae)B.苦丁样品+芦丁对照品(HerbaCordal

7、isbungeanae+referencesubstanceofRutin)1.芦丁(Rutin)图1色谱图1.6线性范围精密吸取3种芦丁对照品稀释液各5μl进样（流动相中的乙腈和水的比例视药材的峰型而定，其他条件不变。对上述含芦丁的20种药材每种都作出其相应的回归方程，这里仅列出3个特殊点上的回归方程Y1、Y2和Y3），记录峰面积，重复3次取平均值。以对照品溶液浓度（X）与其相应峰面积（Y）求得回归方程和相关系数为：Y1=1.484×106X+1420，r=0.9999。（乙腈∶水=30∶70）Y2=1.405×106X+1685，r=0.9998。

8、（乙腈∶水=20∶80）Y3=1.316×106X+1329，r=0.9999。（乙腈∶水=1