紫草素诱导白血病细胞K562凋亡的研究.doc

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1、紫草素诱导白血病细胞K562凋亡的研究作者:陈志炉蒋慧芳史亦谦周郁鸿【摘要】目的探讨紫草素对人白血病K562细胞的诱导凋亡作用。方法MTT显色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用;形态学观察分析DNA琼脂糖凝胶电泳;AnnexinV/PI双标记法检测紫草素对K562细胞的凋亡效应;Caspase检测K562细胞凋亡通路。结果紫草素0.25~8μg/ml浓度即能明显抑制K562细胞的增殖,并具有时间和浓度的依赖性。1μg/ml紫草素作用48h后的K562细胞出现凋亡细胞的特征。1~4μg/ml浓度紫草素诱导K562细胞凋亡具有

2、明显的量效关系,2μg/ml紫草素在0~72h内诱导K562细胞凋亡具有明显的时效关系;DNA凝胶电泳呈现细胞凋亡的典型梯形条带;紫草素诱导K562细胞凋亡经历了Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9的激活。结论紫草素能有效地诱导K562细胞凋亡,并主要通过线粒体凋亡通路。【关键词】紫草素K562细胞细胞凋亡  【Abstrat】ObjectiveToevaluatetheapoptoticinductionofshikoninonhumanleukemiaK562cells.MethodsMTTcolori

3、metricassaywasusedtoexaminethegrowthinhibitionofshikoninonK562cells.TheapoptosisofK562cellswasdetectedbycellmorphologicalobservation,DNAagarosegelelectrophoresisandAnnexinV/PIdoublelabeling.Theapoptosispathwaywastestedbyactivationofcaspase.ResultsShikoninsignificantl

4、yinhibitedthegrowthofK562cellsinaconcentration-depedentandtime-dependentmannerattherangeof0.25to8ug/ml.TheK562cellstreatedwith1.0ug/mlshikoninfor48hoursshowedmorphologicalcharacteristicsofapoptoticcells;TheK562cellstreatedwithshikoninofdifferentconcentration(1.0,2.0,

5、4.0ug/ml)for48hours;with2.0μg/mlshikoninfor24,48and72hours;inductionofapoptosiswasassociatedwithexposuretimeandconcentration.TherewastypicalladderstrapinDNAgelelectrophoresis.ShikonininducedK562cellsapoptosisinvolvedintheactivationofcaspase-3,caspase-6andcaspase-9.Co

6、nclusionShikonincaninduceapoptosisofhumanleukemiaK562cells,andthekeyismitochondrialapoptosispathways.  【Keywords】ShikoninK562cellsApoptosis   紫草素是从紫草根中提取的萘醌类化合物,可对多种肿瘤起抑制和诱导凋亡作用[1,2]。目前国内尚无紫草素诱导白血病细胞凋亡的研究报道。作者观察了紫草素对白血病细胞的增殖和凋亡作用,并对其作用机制进行初步探讨,以为临床应用紫草素治疗白血病提供一定的实验依据

7、。5  1材料与方法  1.1主要试剂及药品  小牛血清(杭州四季青生物研究所),RPMI1640培养粉(Gibco)、琼脂糖(上海东海制药厂),二甲基亚砜(DMSO,江苏洪声化工厂产品,分析纯),3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT,Sigma)、AnnexinV/PI试剂盒(BenderMedsystems)、DNA提取试剂盒(上海申能博彩生物公司),Caspases试剂盒(R&D)、紫草素(中国药品生物制品检定所)。  1.2细胞培养  K562细胞用含体积分数为10%热灭活小牛血清(5

8、6℃,灭活30min)的RPMI1640培养基,置37℃体积分数为5%的CO2培养箱中常规培养,每2~4d传代一次,取对数生长期细胞进行实验。  1.3紫草素对细胞生长抑制作用的观察  取对数生长期的K562细胞按5×104/ml的密度接种于96孔板,每组设6个

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