紫草素诱导白血病细胞K562凋亡的研究

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1、紫草素诱导白血病细胞K562凋亡的研究作者：陈志炉蒋慧芳史亦谦周郁鸿【摘要】目的探讨紫草素对人白血病K562细胞的诱导凋亡作用。方法MTT显色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用；形态学观察分析DNA琼脂糖凝胶电泳；AnnexinV/PI双标记法检测紫草素对K562细胞的凋亡效应；Caspase检测K562细胞凋亡通路。结果紫草素～8μg/ml浓度即能明显抑制K562细胞的增殖，并具有时间和浓度的依赖性。1μg/ml紫草素作用48h后的K562细胞出现凋亡细胞的特征。1～4μg/ml浓度紫草素诱导K562细胞凋亡

2、具有明显的量效关系，2μg/ml紫草素在0～72h内诱导K562细胞凋亡具有明显的时效关系；DNA凝胶电泳呈现细胞凋亡的典型梯形条带；紫草素诱导K562细胞凋亡经历了Caspase-3、Caspase-6和Caspase-9的激活。结论紫草素能有效地诱导K562细胞凋亡，并主要通过线粒体凋亡通路。【关键词】紫草素K562细胞细胞凋亡【Abstrat】ObjectiveToevaluatetheapoptoticinductionofshikoninonhumanleukemiaK56cells.MethodsMTTc

3、olorimetricassaywasusedtoexaminethegrowthinhibitionofshikoninonK56cells.TheapoptosisofK56cellswasdetectedbycellmorphologicalobservation,DNAagarosegelelectrophoresisandAnnexinV/PIdoublelabeling.Theapoptosispathwaywastestedbyactivationofcaspase.ResultsShikoninsig

4、nificantlyinhibitedthegrowthofK56cellsinaconcentration-depedentandtime-dependentmannerattherangeof/ml.TheK56cellstreatedwith/mlshikoninforhoursshowedmorphologicalcharacteristicsofapoptoticcells;TheK56cellstreatedwithshikoninofdifferentconcentration(,.0,.0ug/ml)

5、forhours;μg/mlshikoninfor4,andhours;inductionofapoptosiswasassociatedwithexposuretimeandconcentration.TherewastypicalladderstrapinDNAgelelectrophoresis.ShikonininducedK56cellsapoptosisinvolvedintheactivationofcaspase-3,caspase-andcaspase-9.ConclusionShikonincan

6、induceapoptosisofhumanleukemiaK56cells,andthekeyismitochondrialapoptosispathways.【Keywords】ShikoninK56cellsApoptosis　　　紫草素是从紫草根中提取的萘醌类化合物，可对多种肿瘤起抑制和诱导凋亡作用［１，２］。目前国内尚无紫草素诱导白血病细胞凋亡的研究报道。作者观察了紫草素对白血病细胞的增殖和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨，以为临床应用紫草素治疗白血病提供一定的实验依据。　　1材料与方法主要试剂及药品小

7、牛血清，RPMI1640培养粉、琼脂糖，二甲基亚砜，3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐、AnnexinV/PI试剂盒、DNA提取试剂盒，Caspases试剂盒、紫草素的RPMI1640培养基，置37℃体积分数为5%的CO2培养箱中常规培养，每2～4d传代一次，取对数生长期细胞进行实验。紫草素对细胞生长抑制作用的观察　　取对数生长期的K562细胞按5×104/ml的密度接种于96孔板，每组设6个平行孔，分别加入紫草素，使实验组的终浓度分别为μg/ml、μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、4μg

8、/ml、8μg/ml，对照组加入等体积的RPMI1640培养液，置37℃、5%CO2的培养箱中培养。分别于作用24、48、72h时取出96孔板，加入5mg/ml的MTT0μl在相同条件下继续培养4h后离心5min，吸取上清液，每孔加入DSMO150μl，振荡20min，用酶标仪于570nm处测定各孔的吸光度值。抑制率=/A对照×100%。细胞形