GLT1参与大鼠脑缺血预处理诱导的脑缺血耐受.doc

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1、GLT1参与大鼠脑缺血预处理诱导的脑缺血耐受作者：耿进霞　潘培森　李领香【摘要】　　目的应用谷氨酸转运体GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK)验证GLT1在脑缺血耐受诱导中的作用。方法采用四血管闭塞法(4VO)制作大鼠全脑缺血模型。脑组织切片硫堇染色法观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡(DND)程度。结果预先给予3min脑缺血预处理(CIP)可显著对抗8min缺血打击引起的DND；与CIP+脑缺血打击(IS)组相比，DHK+CIP+IS组出现明显的DND。结论GLT1参与了CIP诱导的脑缺血耐受。【关键词】脑缺血预处理　DHK

2、　大鼠　　【Abstract】ObjectiveTheroleofglutamatetransportersubtypeGLT1intheacquisitionofbrainischemictolerancewasinvestigatedbyadministeringdihydrokainate(DHK),aselectiveinhibitorofGLT1.MethodsGlobalcerebralischemicmodelwasmadebyFourvesselocclusion.Thebrainoftheratswassect

3、ionedandstainedwiththionintoshowthedegreeofdelayedneuronaldeath(DND)intheCA1hippocampus.ResultsCerebralischemicpreconditioning(CIP)for3minuteseffectivelyprotectedpyramidalneuronsintheCA1hippocampusagainstDNDnormallyinducedbyischemicinsultfor8minutes.DNDwassignificantlyo

4、bviousinDHK+CIP+brainischemicinsult(IS)groupcomparedwithCIP+ISgroup.ConclusionGLT1participatesinbrainischemictoleranceinducedbyCIP.　　　　【Keywords】Cerebralischemicpreconditioning；Dihydrokainate；Rat　　　　脑缺血预处理(cerebralischemicpreconditioning，CIP)［1］对后续的缺血性打击产生保护作用，这一现象被称为脑

5、缺血耐受(brainischemictolerance，BIT)。脑缺血时细胞外液中谷氨酸等兴奋性氨基酸浓度异常增高，从而产生兴奋性神经毒性，谷氨酸转运体(glutamatetransporter，GLT)可调控脑内细胞外液谷氨酸浓度，其中星形胶质细胞GLT1的作用尤为重要［2］。本试验旨在观察二氢卡因酸盐(dihydrokainate，DHK)对海马BIT的影响，探讨GLT1在BIT诱导中的作用。　　1材料与方法　　1.1动物模型及分组采用四血管闭塞法(4vesselocclusion,4VO)制造大鼠全脑缺血模型。健康雄性

6、Wistar大鼠(280～320g)36只2，由河北医科大学实验动物中心提供。凝闭双侧椎动脉2d的动物随机分为6组，每组6只：①假手术组：只暴露双侧颈总动脉，不阻断血流；②CIP组：夹闭双侧颈总动脉3min；③脑缺血打击(IS)组：夹闭双侧颈总动脉8min；④CIP+IS组：夹闭双侧颈总动脉3min作为CIP，再灌注2d后再夹闭双侧颈总动脉8min；⑤DHK组：右侧脑室注射200nmolDHK溶液；⑥DHK+CIP+IS组：CIP前20min注射200nmolDHK溶液，余同④。　　1.2观察指标以上各组动物末次手术后7d断头取脑，常

7、规组织切片，硫堇染色观察海马组织学改变。参照Kato［3］方法分级，计数海马CA1区每1mm区段内锥体细胞数目。　　1.3数据处理应用SPSS软件进行统计分析。　　2结果　　假手术组和CIP组海马CA1区锥体细胞排列整齐，细胞形态完整，胞核饱满，核仁清晰；IS组中出现明显的DND；CIP＋IS组海马组织学表现与相对应的IS组相比明显好转(P＜0.01)；DHK+CIP+IS组中，与CIP＋IS组相比，其组织学分级升高，神经元密度下降，表明DHK阻断了CIP对海马CA1区锥体神经元的保护作用，见表1。　　表1DHK对脑缺血预处理诱导海马

8、CA1区脑缺血耐受的影响（略）　　与假手术组比较，*P＜0.01,与IS组比较，★P＜0.01,与CIP+IS组比较，▲P＜0.01　　3讨论　　研究表明，许多内源性触发因子或介质参与CIP的细胞保护作用，但CIP是否通