低氧诱导因子1α在大鼠脑缺血耐受中的表达

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1、低氧诱导因子1α在大鼠脑缺血耐受中的表达【摘要】目的探讨脑缺血耐受中低氧诱导因子?1α（HIF?lα）的表达。方法84只CAO组，40只）和缺血预处理组（IP+MCAO组，40只）。线栓法阻塞大脑中动脉建立缺血预处理模型，分别于预缺血后1、3、7、14、21d再缺血2h，然后取脑经苏木精?伊红染色后光镜下进行病理观察，免疫组化方法检测脑组织HIF?1α蛋白的表达。结果IP+MCAO组中1、3、7d的HIF?1α蛋白表达水平与SS+MCAO组中相应时间点比较，差异具有显著性（t=2.449～9.89

2、8，P＜0.05）。结论HIF?1α在脑缺血耐受中表达上调，可能是导致脑缺血耐受的分子机制之一。【关键词】低氧诱导因子1缺血预处理缺血低氧脑大鼠［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheexpressionofhypoxiainduciblefactor?1α(HIF?1α)inthebrainischemicmodelofrats.MethodsHealthyCAO)group(SS+MCAO,n=40)andtheischemicpreconditioningand

3、MCAOgroup(IP+MCAO,n=40).Aratmodeloffocalischemicpreconditioningiddlecerebralartery.Atday1,3,7,4,and21afterthepreconditioning,anothertiaentalanimal.Thepathologyesofinfarctareaeasured,andtheexpressionoftheHIF?1αdetectedviaimmunohistochemicaltechnique.Re

4、sultsThelevelsofHIF?1αexpressioninratsofIP+MCAOgroupatday1,3,and7afterthepreconditioningaybeoneofthemolecularmechanismsinthebrainischemictolerance.［KEYCAO组，40只）：预缺血10min后按再灌注不同时间（1、3、7、14、21d）分为5个亚组；假手术组（SS+MCAO组，40只）：分按前述时间点5个亚组；对照组（SS+SS组，4只）。1.2模型的

5、制备缺血预处理参照文献[2,3]方法进行。再缺血的处理按再灌注的不同时间在规定时间点再次麻醉大鼠，将埋在皮下的线栓推进（18.5±2.0）mm，再次阻断大脑中动脉造成MCAO，重新结扎ECA近心端，缝合皮肤，2h后将留在皮外的线栓退出至ECA，形成第2次再灌注，完成再缺血处理。1.3实验方法IP＋MCAO组预缺血10min后，分别于再灌注1、3、7、14、21d后阻塞大脑中动脉2h，再灌注22h后处死；SS+MCAO组假手术代替预缺血，在假手术后按前述不同时间点阻塞大脑中动脉2h,再灌注22h后处

6、死；SS+SS组两次均为假手术。1.4神经功能缺损评分参照BEDERSON等[4]5分制法进行评分。评分累积1分以上认定为造模成功。1.5脑组织病理观察每组随机选取4只大鼠，心脏灌注生理盐水、40g/L多聚甲醛各约200mL，断头取脑，取前囟后3～6mm部位组织，40g/L多聚甲醛后固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，片厚5μm。HE染色后镜下观察组织病理学变化。1.6HIF?1α蛋白检测采用SABC法。SABC试剂盒、兔抗鼠HIF?1α单克隆抗体（一抗）购自武汉博士德生物工程有限公司。大鼠水合氯

7、醛麻醉后，心脏依次灌注生理盐水、40g/L多聚甲醛各约200mL，断头取脑，取前囟后3～6mm部位组织，多聚甲醛后固定4h，脱水、透明、浸蜡、包埋、切片，片厚5μm。每只动物取3张切片，常规脱蜡至水。体积分数0.03的H2O2灭活内源性酶，抗原热修复，滴加1∶200工作浓度的HIF?1α单克隆抗体。4℃过夜后，依次滴加生物素化二抗、试剂SABC，37℃各孵育30min，DAB显色，镜下控制反应时间。梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封片。参照文献[5]的方法进行观察。1.7图像分析采用SimplePCI显

8、微图像分析系统进行图像分析，测量免疫组化染色的平均吸光度（A）值。1.8统计学处理采用SPSS11.5软件包进行统计学处理，检测结果以±s表示。各组同一时间点之间比较采用t检验，组内不同时间点比较采用方差分析。2结果2.1神经功能缺损评分SS+SS组神经功能评分为0。IP+MCAO组3、7d神经功能评分均低于SS+MCAO组，差异具有统计学意义（t=4.025、2.683，P＜0.05）。SS+MCAO组中各时间点间比较差异无显著性；IP+MCAO组中3d与其他时间比较，差异具有显