银耳多糖及其抗肿瘤活性的研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.comVo1．3No．3‘天然产物研究与开发)一九九一年九月银耳多糖及其抗肿瘤活性的研究(I)高其品张大军刘平李丙川(吉林省中医中药研究院长春130021)摘要银耳子实体热水提取物经乙醇沉淀、乙酸铜分部及DEAE-纤维素柱层析，得五个多糖部分(BI—BV)，进行了组成糖分析，测定了它们对离体Hela细胞的杀伤作用。对癌细胞有一定杀伤作用的BII部分进行了进一步的分离纯化，从中得到四个多糖级分(BII-l一4)。通过凝胶柱层析，醋酸纤维素薄膜电泳，汪明BII一1，BII一3为纯化多糖，它们的分子量分别为100万和8万，BII-1是由半乳糖和半乳糖醛酸组

2、成，在银耳中，尚未有这类多糖的报道．关键词银耳，多糖，抗癌作用银耳(TremellafuciformisBerk)公司出品。在我国有悠久的药用和食用历史。近年=、方法来，对银耳的化学成分及药理活性进行了许多研究。其子实体热水提取物具有增强1．粗多糖的制备免疫、抗溃疡和抗放射等作用【。对小鼠银耳(2000g)以水煎煮三次，煎煮肉瘤S一180盼生长有一定抑制作用【。目液浓缩后以三倍量95％乙酵沉淀，放置过前已由其子实体中分离纯化出葡聚糖、中夜，抽滤，沉淀减压干燥，得银耳粗多性杂多糖、酸性杂多糖，并研究了它们的糖。-粗多糖(150g)，溶于1000ml0．1N结构和抗肿瘤活性【。】【‘】为开发它的

3、药J氢氧化钠溶液中，搅拌下，加入等体积价值，我们对其所含的多糖成分，以抗肿7％乙酸铜溶液，80℃保温1小时，放置瘤活性为指标，进行了筛选和结构研究。过夜，离心(4500rpm)20分，沉淀以本文报道了银耳多糖的分离纯化、分析鉴5％盐酸一乙醇溶液洗至无色，继用95％乙定及对离体Hela细胞的杀伤作用研究。醇洗至中性，抽滤后，沉淀在6O℃减压干燥，得多糖A部分(8．5g)。离心后所得材料和方法的上清液中加入5倍量95％乙醇，放置过夜后抽滤，所得的沉淀用5％盐酸一乙醇液一、材料洗至无色，继用95％乙醇洗至中性，减压银耳购自市场，福建省产。DEAE=干燥得多糖B部分(78．9g)纤维素为上海试剂二厂

4、产品，Sepharose2．离子交换及凝胶柱层析。。4B，6B为Pharmacia公司生产，DoweXB部分10g溶于500ml蒸馏水中，进lx8anionexchangeresin为Dol化学行DEAE-纤维素(OH一)柱层析(1l收稿日期：1991年4只18日维普资讯http://www.cqvip.com44VO1．3NO．360cm，巾：8cm)，控制流速1．5ml／min。用离体培养的Hcla细胞株，培养液为含依次用蒸馏水，0．05N，0．1N，0．3N，有15％小牛血清的RPM一1640。按照下山0．5NNaCl溶液洗脱，每15ml为流分。-。等抗癌药物的细晦杀作用碡晕方法稍加根

5、据各洗脱流分中碳水化合物的含量制成改进进行分组加药【。生长状态良好的洗脱曲线。凝胶柱层析在Sepharose4B柱Hela细胞经消化液处理(0．25％胰蛋白上进行(L：40cm，；2．5cm)，样品酶和0．02％EDTA按1：1比例混合)，制50mg溶于3ml蒸馏水中，上柱后，以蒸馏备成细胞悬液，。分离细胞率为95％以上水洗脱，恒定流速ld／8sec．，每7ml为一经细胞计数后，将其稀释到1×10。细胞流分，以酚硫酸法测定各流分中的吸收／m1培养液，取10ml培养瓶，每3瓶1组，度(A)绘制出洗脱曲线。每瓶加入lml细胞悬液，加药组加入0．5ml3．分析鉴定含药品培养液，每种药品分成5个剂量

6、梯蛋白质、糖醛酸、总糖含量分别以度，组间剂量比为1：10，对照组加入不Lowry【盯、咔唑【们、酚一硫酸法’测含药品的培养液，经COz孵育箱培养7定，牛血清蛋白(BSA)，半乳糖醛酸和天，待集落长大到1mm左右，经甲醇固葡萄糖为相应的标准品。纸层析以乙酸乙定，Giema染色，记录各组集落数及每组酯：吡啶：乙酸：水(5：5：1：3)为展的均值和标准差，各组接种细胞数与形成开剂，在MN—C微晶纤维素膜上进行。的集落数之比为集落形成率(CEF)，按各样品在121℃，2M的三氟乙酸中水解黔式s：求出存活率(S1．5小时后，挥尽三氟乙酸，加水点样。气相层析在SC-7气相色谱仪上进行，及致死率(1ogl

7、／s)。l％OV一225为固定液多糖经水解(2M三-电泳在醋酸纤维索薄膜上进行。样氟乙酸，121℃，1．5，J、时)，还原(NaBH．，品配制成lmg／lmi水溶液，点样fS,以R．T．)，。乙酰化后(醋l酐，121℃，3小硼砂缓冲液(0．05M~J]砂：O．1MNaOH时)，制成alditolacetates，、所含的酸2：’1)。250V电泳20分钟，继以甲笨胺性糖经离子交换树脂分离后，还原由它们兰染色。