缺血后处理对大鼠肠缺血

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1、缺血后处理对大鼠肠缺血：褚薇薇，武步强，沙焕臣，王殿华【摘要】目的探讨缺血后处理对大鼠肠缺血-再灌注损伤肠黏膜细胞线粒体的影响。方法SD大鼠32只随机分为4组(n=8)：假手术(S)组、缺血-再灌注(I/R)组、缺血预处理(IPC)组、缺血后处理(I-post)组。应用透射电子显微镜、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、激光共聚焦扫描显微镜分别观测各组大鼠肠黏膜细胞线粒体的形态结构、呼吸功能以及线粒体跨膜电位的变化。结果与I/R组相比，I-post组和IPC组大鼠肠黏膜细胞线粒体形态结构改变明显减轻，线粒体呼吸功能和线粒体跨膜电位明

2、显升高(P<0.05)；I-post组与IPC组相比，差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺血后处理抗大鼠肠缺血-再灌注损伤的作用机制可能与改善肠黏膜细胞线粒体的形态结构和呼吸功能及提高线粒体跨膜电位有关。【关键词】缺血-再灌注；缺血后处理；缺血预处理；线粒体；肠黏膜　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatetheeffectsofischemicpostconditioning(I-post)onintestinalmucosamitochondrionafterischemia-repe

3、rfusion(I/R)injuryinratintestine.MethodsByusingratmodelofintestineI/Rinjury,maleSprague-Da-operationgroup(S),I/Rgroup(I/R),ischemicpreconditioninggroup(IPC),andI-postgroup.Intestinalmucosamitochondrialultrastructuralchangesissionelectronmicroscope(TEM).Mucosalcellula

4、rmitochondrialrespirationfunctioneasuringthemitochondrialdehydrogenase-dependentreductionofMTTtoitsformazanderivative,andintestinalmucosalmitochondrialmembranepotentialicroscopy.ResultspareditochondrioninI-postgroupandIPCgroupbegantorecover.Themitochondrialrespirator

5、yfunctionandthemitochondrialmembranepotentialprovedinI-postgroupandIPCgroup(P<0.05).ThereechanismofischemicpostconditioningagainstI/Rinjuryofintestineinratsispartlyrelatedtomaintainingthemitochondrialultrastructuralchangesandrespiratoryfunctionandimprovingmitochon

6、drialmembranepotential.　　　KEYTT)购自美国Sigma公司；线粒体跨膜电位检测试剂盒(JC-1)由碧云天生物技术研究所提供。激光共聚焦扫描系统(德国，型号MCR-1024ES)；透射电子显微镜(日本，型号JEM-011)。　　1.2实验动物　　健康雄性Sprague-Da进腹，用温盐水纱布将肠管推向左侧腹腔，暴露右肾内上方的肠系膜根部，找到肠系膜上动脉(superiormesentericartery,SMA)，在其根部用无创伤血管夹夹闭阻断SMA血运45min，造成肠缺血模型，然后松夹，再灌注1h后

7、经颈动脉放血处死。　　1.2.2动物分组及处理　　动物随机分为4组(n=8)：①假手术(S)组：仅行开腹，分离SMA不夹闭；②缺血-再灌注(I/R)组：方法见模型复制；③缺血预处理(IPC)组：夹闭SMA5min和松夹5min作为预处理，2个循环，余同I/R组；④缺血后处理(I-post)组：缺血45min后即刻行3个循环的灌注30s/阻断30s，余同I/R组。　　1.3标本收集　　于再灌注1h时处死各组大鼠，迅速取距回盲部2cm的小肠组织90cm，分离大鼠肠黏膜细胞的方法参考文献［6］。另取1cm小肠组织浸泡于3.5%(体积分

8、数)戊二醛溶液(4℃保存)中待作透射电子显微镜观察。　　1.4观察项目　　①透射电子显微镜下观察肠黏膜细胞线粒体形态结构的改变；②MTT比色法检测大鼠肠黏膜细胞线粒体的呼吸功能；③激光共聚焦扫描显微镜检测各组大鼠肠黏膜细胞线粒体跨膜电位的变化。严格按照试剂盒说明